| 查看: 1841 | 回复: 9 | |||
auliuym木虫 (著名写手)
|
[求助]
连接后酶切检测遇到的问题
|
|
请教各位分子生物学大德诸君： 我将目的基因插到PET15b中，然后转入DH5a菌株中，再提取质粒、酶切跑胶检测，结果如下图所示： 左边是Marker，下面的胶是未酶切前，上面的是酶切后，泳道从左至右一一对应。可以看出，第3、5、8泳道，经过酶切后出现两条带，上一条应当是质粒，下一条是目的DNA片段，为什么这三个中的质粒条带与第2、4、6、7、9、10中的质粒条带位置不一样？是超螺旋结果的质粒吗？同理，可以看见在下面一块胶中第5、8的质粒条带与其他泳道的不同？为什么？ 望大德诸君不啬赐教，不胜感激！！！有经验者，回答此问题，并很有说服力，将有金币奉上。  20130326.jpg |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 实验交流 |
» 猜你喜欢
含氟糖皮质激素的外用抗炎利器醋酸氟轻松
已经有0人回复
-
阿莫奈韦（Amenamevir）：解旋酶-引物酶靶向分子的结构特征与合成路径全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有158人回复
-
利瑞鲁单抗：靶向KIR的NK细胞检查点工具抗体，结构基础与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- PCR产物纯化后酶切，连接
已经有28人回复
- 连接检测时双酶切总是切不开
已经有9人回复
- 双酶切之后，线状质粒的连接问题
已经有13人回复
- 酶切酶连转化后单克隆检测不对
已经有8人回复
- 载体和酶切片段连接的问题
已经有5人回复
- 连接产物双酶切
已经有11人回复
- 关于酶切后的连接问题，共同探讨共同进步
已经有18人回复
- 双酶切，连接，转化问题
已经有30人回复
- 酶切后未纯化连接出现的问题
已经有18人回复
- 本人做了双酶切连接转化，真的真的有想死的心了
已经有6人回复
- 基因克隆中酶切连接问题
已经有13人回复
- 酶切酶连转化
已经有11人回复
- 单酶切连接的问题
已经有4人回复
- 连接酶切问题
已经有10人回复
- 单酶切，酶连之后验证问题
已经有6人回复
- PCR产物酶切检测不到东西是为什么
已经有11人回复
- PCR是阳性但酶切是阴性，怎么回事？
已经有10人回复
- 酶连之后如何检测？
已经有7人回复
- 【求助/交流】质粒双酶切连接问题
已经有7人回复
- 【求助/交流】关于酶切连接转化的问题
已经有10人回复
- 【求助/交流】酶切连接后的分子大小问题
已经有12人回复
- 【求助/交流】关于酶切产物连接的一点问题
已经有13人回复
小科研女dow
木虫 (小有名气)
- MolEPI: 1
- 应助: 21 (小学生)
- 金币: 3823.2
- 散金: 20
- 红花: 2
- 帖子: 187
- 在线: 163.4小时
- 虫号: 2112648
- 注册: 2012-11-07
- 性别: MM
- 专业: 环境微生物学
2楼2013-03-26 17:24:59
auliuym
木虫 (著名写手)
- 应助: 7 (幼儿园)
- 金币: 7326.5
- 散金: 542
- 红花: 42
- 帖子: 2787
- 在线: 212.8小时
- 虫号: 1513072
- 注册: 2011-11-28
- 性别: GG
- 专业: 数论
3楼2013-03-26 17:46:16
【答案】应助回帖
★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2013-03-27 13:41:54
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2013-03-27 13:41:54
|
从你的图上看，第2、5、8三个和其他的不一样，从酶切图看也是这样，但是切下来的片段大小是一样的，所以可能是载体不一样，也就是2、5、8和其他的是不同的载体，连的目的基因是一样的。 载体不一样可能有两个原因：一是载体本身发生了变异，如片段缺失，这个可能性不大，另一个就是载体污染，混入了其他载体。 我的建议是用载体上其他的酶切位点对应的两种酶切了试试，如果有的能切开而有的切不开，就说明是载体出了问题。 另外，你要是赶进度，可以这样处理：你用的载体大小应该知道的，用那个正确的往下做就OK啦，反正双酶切验证是正确的。 |
4楼2013-03-27 10:14:15
5楼2013-03-27 10:18:18
auliuym
木虫 (著名写手)
- 应助: 7 (幼儿园)
- 金币: 7326.5
- 散金: 542
- 红花: 42
- 帖子: 2787
- 在线: 212.8小时
- 虫号: 1513072
- 注册: 2011-11-28
- 性别: GG
- 专业: 数论
6楼2013-03-27 12:23:40
7楼2013-03-28 12:05:54
auliuym
木虫 (著名写手)
- 应助: 7 (幼儿园)
- 金币: 7326.5
- 散金: 542
- 红花: 42
- 帖子: 2787
- 在线: 212.8小时
- 虫号: 1513072
- 注册: 2011-11-28
- 性别: GG
- 专业: 数论
8楼2013-03-29 14:26:35
aleismile
银虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 288
- 散金: 20
- 帖子: 28
- 在线: 7.3小时
- 虫号: 2481159
- 注册: 2013-05-25
- 性别: GG
- 专业: 蛋白质组学
9楼2013-11-27 23:58:19
auliuym
木虫 (著名写手)
- 应助: 7 (幼儿园)
- 金币: 7326.5
- 散金: 542
- 红花: 42
- 帖子: 2787
- 在线: 212.8小时
- 虫号: 1513072
- 注册: 2011-11-28
- 性别: GG
- 专业: 数论
10楼2013-12-05 14:43:06
40