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auliuym木虫 (著名写手)
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连接后酶切检测遇到的问题
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请教各位分子生物学大德诸君： 我将目的基因插到PET15b中，然后转入DH5a菌株中，再提取质粒、酶切跑胶检测，结果如下图所示： 左边是Marker，下面的胶是未酶切前，上面的是酶切后，泳道从左至右一一对应。可以看出，第3、5、8泳道，经过酶切后出现两条带，上一条应当是质粒，下一条是目的DNA片段，为什么这三个中的质粒条带与第2、4、6、7、9、10中的质粒条带位置不一样？是超螺旋结果的质粒吗？同理，可以看见在下面一块胶中第5、8的质粒条带与其他泳道的不同？为什么？ 望大德诸君不啬赐教，不胜感激！！！有经验者，回答此问题，并很有说服力，将有金币奉上。  20130326.jpg |
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auliuym
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3楼2013-03-26 17:46:16
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2楼2013-03-26 17:24:59
【答案】应助回帖
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感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2013-03-27 13:41:54
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从你的图上看，第2、5、8三个和其他的不一样，从酶切图看也是这样，但是切下来的片段大小是一样的，所以可能是载体不一样，也就是2、5、8和其他的是不同的载体，连的目的基因是一样的。 载体不一样可能有两个原因：一是载体本身发生了变异，如片段缺失，这个可能性不大，另一个就是载体污染，混入了其他载体。 我的建议是用载体上其他的酶切位点对应的两种酶切了试试，如果有的能切开而有的切不开，就说明是载体出了问题。 另外，你要是赶进度，可以这样处理：你用的载体大小应该知道的，用那个正确的往下做就OK啦，反正双酶切验证是正确的。 |
4楼2013-03-27 10:14:15
5楼2013-03-27 10:18:18