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ygw198781

新虫 (初入文坛)

[求助] 真菌I型PKS基因PCR出现非特异性条带 已有1人参与

3对引物:KAF1/KAR1、KAF1/KAR2、LC1/LC2C
KAF1(5’-GAR KSI CAY GGI ACI GGI AC-3’);
KAR1(5’-CCA YTG IGC ICC RTG ICC IGA RAA-3’);
KAR2(5’-CCA YTG IGC ICC YTG ICC IGT RAA-3’);
LC1(5’-GAY CCI MGI TTY TTY AAY ATG-3’);
LC2C(5’-GTI CCI GTI CCR TGC ATY TC-3’)

PCR条件(50μ)
95℃ 4min;

95℃ 30s
50℃ 1min    35个cycle      
72℃ 2min

72℃ 10min;

PCR结果条带应该在800bp左右,可实际结果在800bp左右却有好几条条带,位置非常相近,几乎连在一起,无法回收。想问一下大侠们,是PCR条件有问题还是这个菌本身就没有这个片段?

图片2.gif
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2楼2017-04-05 10:51:57
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