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ygw198781

新虫 (初入文坛)

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[求助] 真菌I型PKS基因PCR出现非特异性条带已有1人参与

3对引物：KAF1/KAR1、KAF1/KAR2、LC1/LC2C
KAF1（5’-GAR KSI CAY GGI ACI GGI AC-3’）；
KAR1（5’-CCA YTG IGC ICC RTG ICC IGA RAA-3’）；
KAR2（5’-CCA YTG IGC ICC YTG ICC IGT RAA-3’）；
LC1（5’-GAY CCI MGI TTY TTY AAY ATG-3’）；
LC2C（5’-GTI CCI GTI CCR TGC ATY TC-3’）

PCR条件（50μ）
95℃ 4min；

95℃ 30s
50℃ 1min 35个cycle
72℃ 2min

72℃ 10min；

PCR结果条带应该在800bp左右，可实际结果在800bp左右却有好几条条带，位置非常相近，几乎连在一起，无法回收。想问一下大侠们，是PCR条件有问题还是这个菌本身就没有这个片段？

图片2.gif

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1楼 2013-03-14 23:17:21

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