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真菌I型PKS基因PCR出现非特异性条带已有1人参与
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3对引物：KAF1/KAR1、KAF1/KAR2、LC1/LC2C KAF1（5’-GAR KSI CAY GGI ACI GGI AC-3’）； KAR1（5’-CCA YTG IGC ICC RTG ICC IGA RAA-3’）； KAR2（5’-CCA YTG IGC ICC YTG ICC IGT RAA-3’）； LC1（5’-GAY CCI MGI TTY TTY AAY ATG-3’）； LC2C（5’-GTI CCI GTI CCR TGC ATY TC-3’） PCR条件（50μ） 95℃ 4min； 95℃ 30s 50℃ 1min 35个cycle 72℃ 2min 72℃ 10min； PCR结果条带应该在800bp左右，可实际结果在800bp左右却有好几条条带，位置非常相近，几乎连在一起，无法回收。想问一下大侠们，是PCR条件有问题还是这个菌本身就没有这个片段？  图片2.gif |
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2楼2017-04-05 10:51:57