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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR产物纯化后酶切，连接
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lishaohe

新虫 (小有名气)

[交流] PCR产物纯化后酶切，连接

最近需要通过PCR产物，酶切，连接转化B L21建菌库，但是PCR产物酶切，连接转化效率很低，请问各位大虾，有没有更好的办法。引物加了保护碱基。或者更好的建库方案，谢谢！
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1楼 2013-03-02 15:21:51
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
不同的酶切割末端的位点时的效率是不同的，即使加了保护碱基提高切割效率，通常还是会比切中间的时候效率低。不知道你用的哪两个酶，一般是根据效率延长切割时间或者适当增加酶的用量。
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9楼2013-03-03 01:42:59
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peakg7

新虫 (小有名气)
★
lishaohe(金币+3): 谢谢参与
送鲜花一朵
pcr产物直接回收，不要跑胶回收，效率会提高很多倍。
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2楼2013-03-02 15:30:00
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lishaohe

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by peakg7 at 2013-03-02 15:30:00
pcr产物直接回收，不要跑胶回收，效率会提高很多倍。

我们就是直接回收的，片段很亮。直接用的就是PCR产物回收试剂盒
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3楼2013-03-02 15:40:08
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peakg7

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by lishaohe at 2013-03-02 15:40:08
我们就是直接回收的，片段很亮。直接用的就是PCR产物回收试剂盒...

酶切效率不高，连接酶的问题？
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4楼2013-03-02 16:15:41
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