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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】克隆载体的制备 连接问题
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wudiguigui99

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】克隆载体的制备 连接问题 已有3人参与

制备克隆载体过程中连接反应是PCR得到的目的基因产物与酶切的质粒载体进行反应
问题是
PCR产物是平末端，正常酶切载体得到的是粘性末端，两者具体是什么原理或者机制连接上的啊 ，连接体系中也没有dNTP啊？
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1楼 2010-11-16 21:16:48
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克隆大虾

铁杆木虫 (著名写手)
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scelab(金币+1):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-11-17 23:10:13
PCR引物上引入合适酶切位点，所以PCR产物与质粒分别酶切，然后纯化后连接，完成PCR产物亚克隆。
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2楼2010-11-16 22:26:44
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wudiguigui99

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 克隆大虾 at 2010-11-16 22:26:44:
PCR引物上引入合适酶切位点，所以PCR产物与质粒分别酶切，然后纯化后连接，完成PCR产物亚克隆。

那其实就是 等同于粘性末端与粘性末端的连接，是吧?>
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3楼2010-11-17 18:34:36
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ben1147

木虫 (正式写手)
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引用回帖:
Originally posted by wudiguigui99 at 2010-11-16 21:16:48:
制备克隆载体过程中连接反应是PCR得到的目的基因产物与酶切的质粒载体进行反应
问题是
PCR产物是平末端，正常酶切载体得到的是粘性末端，两者具体是什么原理或者机制连接上的啊 ，连接体系中也没有dNTP啊？

要么粘末端和粘末端连（载体和PCR片段都酶切，或者3'端有A的Taq酶PCR片段和T载体）
要么平末端和平末端连

没有一平一粘连的吧。。。。。。。。
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4楼2010-11-17 19:27:58
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克隆大虾

铁杆木虫 (著名写手)
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引用回帖:
Originally posted by wudiguigui99 at 2010-11-17 11:34:36:



那其实就是 等同于粘性末端与粘性末端的连接，是吧?>

恭喜你，回答灰常正确....
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5楼2010-11-17 19:59:16
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