24小时热门版块排行榜    

查看: 1057  |  回复: 4

wudiguigui99

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】克隆载体的制备 连接问题 已有3人参与

制备克隆载体过程中连接反应是PCR得到的目的基因产物与酶切的质粒载体进行反应
问题是
PCR产物是平末端,正常酶切载体得到的是粘性末端,两者具体是什么原理或者机制连接上的啊 ,连接体系中也没有dNTP啊?
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

克隆大虾

铁杆木虫 (著名写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
scelab(金币+1):欢迎多来交流!:tiger06: 2010-11-17 23:10:13
PCR引物上引入合适酶切位点,所以PCR产物与质粒分别酶切,然后纯化后连接,完成PCR产物亚克隆。
2楼2010-11-16 22:26:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wudiguigui99

银虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by 克隆大虾 at 2010-11-16 22:26:44:
PCR引物上引入合适酶切位点,所以PCR产物与质粒分别酶切,然后纯化后连接,完成PCR产物亚克隆。

那其实就是 等同于粘性末端与粘性末端的连接,是吧?>
3楼2010-11-17 18:34:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ben1147

木虫 (正式写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
scelab(金币+1):欢迎多来交流!:tiger06: 2010-11-17 23:10:21
引用回帖:
Originally posted by wudiguigui99 at 2010-11-16 21:16:48:
制备克隆载体过程中连接反应是PCR得到的目的基因产物与酶切的质粒载体进行反应
问题是
PCR产物是平末端,正常酶切载体得到的是粘性末端,两者具体是什么原理或者机制连接上的啊 ,连接体系中也没有dNTP啊?

要么粘末端和粘末端连(载体和PCR片段都酶切,或者3'端有A的Taq酶PCR片段和T载体)
要么平末端和平末端连

没有一平一粘连的吧。。。。。。。。
4楼2010-11-17 19:27:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

克隆大虾

铁杆木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by wudiguigui99 at 2010-11-17 11:34:36:



那其实就是 等同于粘性末端与粘性末端的连接,是吧?>

恭喜你,回答灰常正确....
5楼2010-11-17 19:59:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 wudiguigui99 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 基金不中,共勉 +5 eulota 2026-08-26 5/250 2026-08-26 23:33 by young90
[基金申请] 看板上这么多中的,有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +3 a089 2026-08-26 3/150 2026-08-26 23:21 by young90
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +7 process2012 2026-08-23 10/500 2026-08-26 19:23 by hmhminy
[基金申请] 系统查不到 +10 董八千 2026-08-26 10/500 2026-08-26 16:30 by Equinoxhua
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +23 koalala 2026-08-24 26/1300 2026-08-26 14:29 by 宝贝虫子
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +4 bjdxyxy 2026-08-26 4/200 2026-08-26 13:12 by qingmu1201
[基金申请] 科研孤儿太难了 +21 我4大白菜 2026-08-20 22/1100 2026-08-26 11:29 by nlgza
[基金申请] 国际合作可查了,中了面上 +18 Ldrop2023 2026-08-26 18/900 2026-08-26 11:15 by cmrandy
[基金申请] 国合可查了 +3 paperzjh 2026-08-26 3/150 2026-08-26 10:41 by LemmonTr
[基金申请] 今天务委会开完了,明天出结果吗 +19 angus9576 2026-08-25 23/1150 2026-08-26 10:03 by zp519
[基金申请] 国合现在查不到了吗? +10 chengyan1220 2026-08-24 20/1000 2026-08-26 08:57 by peasantsprig
[基金申请] 牛来!米来!面来! +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
[基金申请] 某些机构,以效率低为荣,以效率低作为存在感 +9 yuleib84 2026-08-25 10/500 2026-08-25 17:14 by alexon
[基金申请] 今日不放榜?网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +17 医学老男孩 2026-08-20 22/1100 2026-08-25 15:36 by 医学老男孩
[基金申请] 如果此刻你正在为国基感到焦虑,不妨来听听这首《基金之外》 +8 scalable 2026-08-24 8/400 2026-08-25 12:52 by jnhyjjm
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +9 图啦图啦 2026-08-24 10/500 2026-08-25 11:59 by 南海小哥
[基金申请] 我面上完蛋了 +13 且听虎啸 2026-08-20 14/700 2026-08-25 09:10 by mrkang
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办? +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
[基金申请] 时间戳今天,20号变了 +5 archvillain 2026-08-20 5/250 2026-08-22 06:12 by hui_daxiao
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
信息提示
请填处理意见