24小时热门版块排行榜    

查看: 1067  |  回复: 4
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

wudiguigui99

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】克隆载体的制备 连接问题 已有3人参与

制备克隆载体过程中连接反应是PCR得到的目的基因产物与酶切的质粒载体进行反应
问题是
PCR产物是平末端,正常酶切载体得到的是粘性末端,两者具体是什么原理或者机制连接上的啊 ,连接体系中也没有dNTP啊?
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

克隆大虾

铁杆木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by wudiguigui99 at 2010-11-17 11:34:36:



那其实就是 等同于粘性末端与粘性末端的连接,是吧?>

恭喜你,回答灰常正确....
5楼2010-11-17 19:59:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答

克隆大虾

铁杆木虫 (著名写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
scelab(金币+1):欢迎多来交流!:tiger06: 2010-11-17 23:10:13
PCR引物上引入合适酶切位点,所以PCR产物与质粒分别酶切,然后纯化后连接,完成PCR产物亚克隆。
2楼2010-11-16 22:26:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wudiguigui99

银虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by 克隆大虾 at 2010-11-16 22:26:44:
PCR引物上引入合适酶切位点,所以PCR产物与质粒分别酶切,然后纯化后连接,完成PCR产物亚克隆。

那其实就是 等同于粘性末端与粘性末端的连接,是吧?>
3楼2010-11-17 18:34:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ben1147

木虫 (正式写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
scelab(金币+1):欢迎多来交流!:tiger06: 2010-11-17 23:10:21
引用回帖:
Originally posted by wudiguigui99 at 2010-11-16 21:16:48:
制备克隆载体过程中连接反应是PCR得到的目的基因产物与酶切的质粒载体进行反应
问题是
PCR产物是平末端,正常酶切载体得到的是粘性末端,两者具体是什么原理或者机制连接上的啊 ,连接体系中也没有dNTP啊?

要么粘末端和粘末端连(载体和PCR片段都酶切,或者3'端有A的Taq酶PCR片段和T载体)
要么平末端和平末端连

没有一平一粘连的吧。。。。。。。。
4楼2010-11-17 19:27:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 面上合作单位盖章 +5 ssyjh 2026-08-27 8/400 2026-09-01 12:58 by ssyjh
[论文投稿] 小白求助 投论文要求的highlights应该如何写 5+3 l1963982152 2026-08-29 4/200 2026-09-01 09:04 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见(F口面上) +7 gdd2018 2026-08-28 12/600 2026-09-01 08:32 by 尼古拉斯小虫
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +6 叶九微 2026-08-26 6/300 2026-08-31 23:54 by yudaoqian88
[基金申请] 国社科又开始会评了,不知道这次命运如何 +7 雨打竹帘 2026-08-30 11/550 2026-08-31 23:16 by hittle2008
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的? +17 爱看书的可乐 2026-08-26 19/950 2026-08-31 21:30 by xiangy672
[基金申请] 面上意见出来了 +12 黄鸟于飞Chao 2026-08-29 23/1150 2026-08-31 18:57 by 黄鸟于飞Chao
[基金申请] 29号明天会评吗 +4 笨笨唐 2026-08-28 4/200 2026-08-31 09:30 by huixian257
[基金申请] 基金不中,共勉 +12 eulota 2026-08-26 12/600 2026-08-31 08:42 by ZJTJZ
[基金申请] 为什么到现在没收到通知? +5 tannykie 2026-08-29 5/250 2026-08-30 21:05 by purplejack
[基金申请] 有没有仍没收到信息的 +7 德尚中行 2026-08-27 8/400 2026-08-30 20:52 by purplejack
[基金申请] 我就是申请一个面上项目而已,这评审意见是按照杰青的条件评的吧? +6 gouxfjh 2026-08-28 11/550 2026-08-30 07:57 by gouxfjh
[基金申请] 国自然评审意见 +13 wangmingqi 2026-08-28 19/950 2026-08-29 10:22 by Poppy1104
[基金申请] 系统查不到 +11 董八千 2026-08-26 11/550 2026-08-28 18:06 by Leogzhya
[基金申请] 看板上这么多中的,有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
[基金申请] 我不理解! +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
[基金申请] 国际合作可查了,中了面上 (EPI+1)(金币+50) +18 Ldrop2023 2026-08-26 18/900 2026-08-26 11:15 by cmrandy
[基金申请] 项目信息和经费信息在系统里都可以看到了 +6 wittyboy 2026-08-26 14/700 2026-08-26 10:55 by wittyboy
[基金申请] 国合可查了 +3 paperzjh 2026-08-26 3/150 2026-08-26 10:41 by LemmonTr
[基金申请] 今天务委会开完了,明天出结果吗 +19 angus9576 2026-08-25 23/1150 2026-08-26 10:03 by zp519
信息提示
请填处理意见