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lishaohe

新虫 (小有名气)


[交流] PCR产物纯化后酶切,连接

最近需要通过PCR产物,酶切,连接转化B L21建菌库,但是PCR产物酶切,连接转化效率很低,请问各位大虾,有没有更好的办法。引物加了保护碱基。或者更好的建库方案,谢谢!
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lishaohe

新虫 (小有名气)


引用回帖:
2楼: Originally posted by peakg7 at 2013-03-02 15:30:00
pcr产物直接回收,不要跑胶回收,效率会提高很多倍。

我们就是直接回收的,片段很亮。直接用的就是PCR产物回收试剂盒
3楼2013-03-02 15:40:08
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peakg7

新虫 (小有名气)



lishaohe(金币+3): 谢谢参与
送鲜花一朵
pcr产物直接回收,不要跑胶回收,效率会提高很多倍。
2楼2013-03-02 15:30:00
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peakg7

新虫 (小有名气)


引用回帖:
3楼: Originally posted by lishaohe at 2013-03-02 15:40:08
我们就是直接回收的,片段很亮。直接用的就是PCR产物回收试剂盒...

酶切效率不高,连接酶的问题?
4楼2013-03-02 16:15:41
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lishaohe

新虫 (小有名气)


引用回帖:
4楼: Originally posted by peakg7 at 2013-03-02 16:15:41
酶切效率不高,连接酶的问题?...

连接酶应该没有问题,估计是PCR片段酶切效率太低,大部分片段都没有切开。也没有办法检测。
5楼2013-03-02 20:34:54
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