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lishaohe

新虫 (小有名气)


[交流] PCR产物纯化后酶切,连接

最近需要通过PCR产物,酶切,连接转化B L21建菌库,但是PCR产物酶切,连接转化效率很低,请问各位大虾,有没有更好的办法。引物加了保护碱基。或者更好的建库方案,谢谢!
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Alphard02

新虫 (初入文坛)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
21楼: Originally posted by zltj2008 at 2013-03-06 11:12:30
试剂盒回收的片段,杂质很多,很影响后续的连接效率。所以我也建议不回收,直接“酒精+醋酸钠沉降”后做酶切,你甚至也可以直接在PCR反应后的体系里直接加内切酶和BSA,不过这种办法不够严谨,构个普通的载体可以, ...

最近用中国药典的PCR-RFLP方法鉴定川贝母,用商业试剂盒扩增后直接进行Sma I 酶切,可是酶切效率一直上不去。不知道将PCR产物纯化后会不会好一些??
28楼2019-03-28 13:45:57
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peakg7

新虫 (小有名气)



lishaohe(金币+3): 谢谢参与
送鲜花一朵
pcr产物直接回收,不要跑胶回收,效率会提高很多倍。
2楼2013-03-02 15:30:00
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lishaohe

新虫 (小有名气)


引用回帖:
2楼: Originally posted by peakg7 at 2013-03-02 15:30:00
pcr产物直接回收,不要跑胶回收,效率会提高很多倍。

我们就是直接回收的,片段很亮。直接用的就是PCR产物回收试剂盒
3楼2013-03-02 15:40:08
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peakg7

新虫 (小有名气)


引用回帖:
3楼: Originally posted by lishaohe at 2013-03-02 15:40:08
我们就是直接回收的,片段很亮。直接用的就是PCR产物回收试剂盒...

酶切效率不高,连接酶的问题?
4楼2013-03-02 16:15:41
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