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lishaohe

新虫 (小有名气)

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[交流] PCR产物纯化后酶切，连接

最近需要通过PCR产物，酶切，连接转化B L21建菌库，但是PCR产物酶切，连接转化效率很低，请问各位大虾，有没有更好的办法。引物加了保护碱基。或者更好的建库方案，谢谢！

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1楼 2013-03-02 15:21:51

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Alphard02

新虫 (初入文坛)

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★
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引用回帖:

21楼: Originally posted by zltj2008 at 2013-03-06 11:12:30
试剂盒回收的片段，杂质很多，很影响后续的连接效率。所以我也建议不回收，直接“酒精+醋酸钠沉降”后做酶切，你甚至也可以直接在PCR反应后的体系里直接加内切酶和BSA，不过这种办法不够严谨，构个普通的载体可以， ...

最近用中国药典的PCR-RFLP方法鉴定川贝母，用商业试剂盒扩增后直接进行Sma I 酶切，可是酶切效率一直上不去。不知道将PCR产物纯化后会不会好一些？？