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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR产物纯化后酶切，连接
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lishaohe

新虫 (小有名气)

[交流] PCR产物纯化后酶切，连接

最近需要通过PCR产物，酶切，连接转化B L21建菌库，但是PCR产物酶切，连接转化效率很低，请问各位大虾，有没有更好的办法。引物加了保护碱基。或者更好的建库方案，谢谢！
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1楼 2013-03-02 15:21:51
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charles08

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
17楼: Originally posted by gyesang at 2013-03-05 18:57:58
如果切不开，楼主可以将PCR片段先构建在克隆载体上比如T载体，抽质粒再酶切回收你的片段，构建到目标载体上

我碰到类似问题也是通过构建到T载体上才解决的
不知这样的原因是什么？增加拷贝数？
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26楼2013-09-21 22:03:16
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peakg7

新虫 (小有名气)
★
lishaohe(金币+3): 谢谢参与
送鲜花一朵
pcr产物直接回收，不要跑胶回收，效率会提高很多倍。
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2楼2013-03-02 15:30:00
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lishaohe

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by peakg7 at 2013-03-02 15:30:00
pcr产物直接回收，不要跑胶回收，效率会提高很多倍。

我们就是直接回收的，片段很亮。直接用的就是PCR产物回收试剂盒
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3楼2013-03-02 15:40:08
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peakg7

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by lishaohe at 2013-03-02 15:40:08
我们就是直接回收的，片段很亮。直接用的就是PCR产物回收试剂盒...

酶切效率不高，连接酶的问题？
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4楼2013-03-02 16:15:41
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