应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 酶活测定问题请教
101/1返回列表
查看: 1551  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

淡竹2066

铜虫 (小有名气)

[求助] 酶活测定问题请教

最近在做一个原核表达蛋白的酶活测定，具体是将镍柱纯化获得的蛋白通过与NADH偶联来检测其活性，为了确保实验的准确性，每次纯化的蛋白样品都做3个平行，结果没什么问题。但是不同批次纯化到的蛋白测定的酶活结果却不能很好的平行，这是为什么呢？纯化过程和酶活测定方法都是按照相同的步骤来做的。不知道有没有虫友也遇到过类似的问题。。。。求助！！！！急！！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-01-18 19:24:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

buggiegoat

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
淡竹2066: 金币+1 2013-01-19 00:05:27
三个平行样品经过一个或三个镍柱？有没先统一原核样品的量（OD值）呢？ 在加试剂时有没把试剂摇均？
赞一下 回复此楼
2楼2013-01-18 21:30:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

淡竹2066

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by buggiegoat at 2013-01-18 21:30:29
三个平行样品经过一个或三个镍柱？有没先统一原核样品的量（OD值）呢？ 在加试剂时有没把试剂摇均？

1.三个平行样是同一批次纯化到的蛋白，测定没什么问题，现在的问题是批次间无法平行
2.至于你说的不同批次纯化前的原核样品的量（OD值）----是菌体浓度吗?这个我倒是没有测过，还有就是每次纯化到的蛋白含量之间也有一定的差别，这个对我测定的比活力影响大吗？
3.我都是将配好的反应体系摇匀后再反应的，这个应该没问题

因为我后面还要继续做点突变寻找酶的活性中心，所以希望现在把数据做稳定方便以后参考，但是现在我的批次间无法对应，那我以后每做一个点突变都得把原始的蛋白表达一次，那样太麻烦了。。。。。
赞一下 回复此楼
3楼2013-01-19 00:14:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

buggiegoat

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

是的，菌体浓度。比如说你做三次实验，在纯化蛋白前，OD都调到1或你所设定的值。纯化后的蛋白，也测浓度，统一后才做活性测，如此便可知误差在那儿。希望能解惑。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
4楼2013-01-19 09:35:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

buggiegoat

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2013-01-23 16:02:19
是的，菌体浓度。比如说你做三次实验，在纯化蛋白前，OD都调到1或你所设定的值。纯化后的蛋白，也测浓度，统一后才做活性测，如此便可知误差在那儿。希望能解惑。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
5楼2013-01-19 09:40:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

buggiegoat

新虫 (初入文坛)
测定后再把结果告诉我。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
6楼2013-01-19 23:32:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Lester11

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
不同批次纯化得到的结果本身就会出现不少偏差，一般的纯化流程不可能有那么好的重复性
赞一下 回复此楼
Followyourheart!
7楼2013-01-20 00:12:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

淡竹2066

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by buggiegoat at 2013-01-19 23:32:08
测定后再把结果告诉我。

嗯，好的。我也打算这两天再重复一次。。
赞一下 回复此楼
8楼2013-01-22 19:03:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

buggiegoat

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

若有蛋白量，就能测出每单位蛋白有多少酶活量。。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
9楼2013-01-22 23:57:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

千年一雨

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

不同批次的酶，如果酶活误差在20%以内是可以接受的。另外，如果酶放的时间不同，可能稳定性会受到影响，导致酶活不同。
赞一下 回复此楼
10楼2013-05-07 20:59:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 淡竹2066 的主题更新
101/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料284求调剂，一志愿郑州大学英一数二 +5 想上岸的土拨鼠 2026-02-28 5/250 2026-03-01 11:23 by gaoxiaoniuma
[考研] 317一志愿华南理工电气工程求调剂 +6 Soliloquy_Q 2026-02-28 11/550 2026-03-01 11:14 by 歌liekkas
[考研] 寻找调剂 +4 LYidhsjabdj 2026-02-28 4/200 2026-03-01 10:56 by sunny81
[考研] 材料学调剂 +6 提神豆沙包 2026-02-28 8/400 2026-03-01 10:53 by sunny81
[考研] 材料化工调剂 +5 今夏不夏 2026-03-01 5/250 2026-03-01 10:46 by ms629
[考研] 291分工科求调剂 +7 science饿饿 2026-03-01 8/400 2026-03-01 10:43 by sunny81
[考研] 272求调剂 +4 材紫有化 2026-02-28 4/200 2026-03-01 09:20 by L135790
[论文投稿] 求助coordination chemistry reviews 的写作模板 10+3 ljplijiapeng 2026-02-27 4/200 2026-03-01 09:07 by babero
[论文投稿] Optics letters投稿被拒求助 30+3 luckyry 2026-02-26 4/200 2026-03-01 09:06 by babero
[考研] 材料类求调剂 +7 wana_kiko 2026-02-28 7/350 2026-03-01 07:55 by ms629
[考研] 285求调剂 +6 满头大汗的学生 2026-02-28 6/300 2026-03-01 06:29 by Trying]
[基金申请] 面上模板改不了页边距吧？ +5 ieewxg 2026-02-25 6/300 2026-03-01 00:10 by addressing
[考研] 307求调剂 +4 73372112 2026-02-28 6/300 2026-03-01 00:04 by ll247
[考研] 304求调剂 +3 52hz~~ 2026-02-28 5/250 2026-03-01 00:00 by 52hz~~
[考研] 264求调剂 +3 巴拉巴拉根556 2026-02-28 3/150 2026-02-28 21:31 by gaoxiaoniuma
[考研] 求调剂 +4 repeatt?t 2026-02-28 4/200 2026-02-28 21:16 by gaoxiaoniuma
[考研] 276求调剂 +3 路lyh123 2026-02-28 4/200 2026-02-28 19:45 by 路lyh123
[考研] 0856材料求调剂 +10 hyf hyf hyf 2026-02-28 11/550 2026-02-28 18:50 by 无际的草原
[基金申请] 面上可以超过30页吧？ +12 阿拉贡aragon 2026-02-22 13/650 2026-02-26 22:09 by Hahaxia
[硕博家园] 【博士招生】太原理工大学2026化工博士 +4 N1ce_try 2026-02-24 8/400 2026-02-26 08:40 by N1ce_try
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭