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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 食品 » 微生物、发酵 » 分光光度计测定酶活中的问题
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baobeiqianxi

铁虫 (初入文坛)

[求助] 分光光度计测定酶活中的问题

分光光度计测定酶活，有空白、对照、实验三个待测样品（空白是绘制标准曲线的空白组），若对照组、实验组需稀释，空白也需要稀释吗？
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1楼2012-06-04 15:22:47
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quliuzhu

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你说的不是参比吧？如果是参比的话不用稀释就行了。如果不是那就需要了。
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海纳百川有容乃大，壁立千仞无欲则刚
2楼2012-06-04 15:52:10
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qj062

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
sweety: 金币+1, 鼓励应助,欢迎继续关注食品版 2012-06-04 21:11:51
当然不需要稀释啊，做空白就是用来减去一些试剂本身的干扰，而且空白的吸光值很小的，即使稀释了也不会有太大影响
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3楼2012-06-04 19:49:41
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noise_1987

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
树树8013: 金币+2, 欢迎来到食品板块参与交流。 2012-06-05 16:39:05
我感觉需要稀释，特别是你显色剂有颜色的时候，稀释有否是不是对结果影响很大呢？
试剂空白就是要求除了待测样之外，其他的都要平行操作。
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4楼2012-06-05 08:58:46
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BUU-2011

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
根据我的经验，必须稀释，确保空白的“纯洁”
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5楼2012-06-06 08:33:06
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kbfz

铜虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
空白加了试剂就需要稀释，木有加（就是水咯）当然不用啦~
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竹林芒鞋轻胜马，一蓑烟雨任平生……
6楼2012-06-06 12:21:56
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baobeiqianxi

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by quliuzhu at 2012-06-04 15:52:10
你说的不是参比吧？如果是参比的话不用稀释就行了。如果不是那就需要了。

例如测定蛋白酶活，绘制标准曲线是所用的空白，在测定酶活时需要和对照组、实验组一起稀释吗？
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7楼2012-06-08 10:27:01
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baobeiqianxi

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by qj062 at 2012-06-04 19:49:41
当然不需要稀释啊，做空白就是用来减去一些试剂本身的干扰，而且空白的吸光值很小的，即使稀释了也不会有太大影响

但是测定蛋白酶活时，吸光值就不小啦
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8楼2012-06-08 10:29:40
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baobeiqianxi

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by noise_1987 at 2012-06-05 08:58:46
我感觉需要稀释，特别是你显色剂有颜色的时候，稀释有否是不是对结果影响很大呢？
试剂空白就是要求除了待测样之外，其他的都要平行操作。

但是这样稀释之后就与绘制标准曲线时的空白不同了，会不会对不符合标准曲线？
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9楼2012-06-08 10:31:14
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noise_1987

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
hsd3521: 金币+2, 感谢应助，欢迎常来食品版 2012-06-09 19:46:14
引用回帖:
9楼: Originally posted by baobeiqianxi at 2012-06-08 10:31:14
但是这样稀释之后就与绘制标准曲线时的空白不同了，会不会对不符合标准曲线？...

转帖一个别的论坛上看到的一个关于紫外可见分光光度法中空白的几个概念。分光光度法中的几个空白概念
试样空白：显色剂没有颜色而试液有颜色，或者说在测量波长处，显色剂无吸收，试液有吸收时，应采用不加显色剂的试液作参比溶液，称为试样空白。
溶剂空白：当试液、显色剂及所作用的其他试剂在测定波长处都无吸收时，可采用纯溶剂（如蒸馏水）做参比溶液，称为溶剂空白。
试剂空白：若显色剂有颜色，并且在测量波长处有吸收，但试液在测量条件下没有吸收，在这种情况下，可用不含试液而显色剂和其他试剂都相同的溶液作参比溶液，称为试剂空白。
褪色空白：能够多选择性地与有色络合物中的被测离子作用，使络合物破坏而褪色，然后以它作为参比溶液的一种试剂，称为褪色空白。


我认为的紫外可见用于定量一般是这样的流程。
1制作标准曲线（就是你说的对照）
2测样品组，利用标准曲线根据吸光度求出待测样浓度
3根据比例计算样品量。
自然你标准曲线的反映体系跟样品的反映体系应该是相同的，空白也是一样的，只是把你的标准品（对照品）换成空白（一般用你溶解试样或标准品的液体，比如说你使用蒸馏水溶解样品，那空白就是等量的蒸馏水）
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10楼2012-06-08 23:00:20
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