应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 酶活测定问题请教
51/1返回列表
查看: 1584  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

淡竹2066

铜虫 (小有名气)

[求助] 酶活测定问题请教

最近在做一个原核表达蛋白的酶活测定，具体是将镍柱纯化获得的蛋白通过与NADH偶联来检测其活性，为了确保实验的准确性，每次纯化的蛋白样品都做3个平行，结果没什么问题。但是不同批次纯化到的蛋白测定的酶活结果却不能很好的平行，这是为什么呢？纯化过程和酶活测定方法都是按照相同的步骤来做的。不知道有没有虫友也遇到过类似的问题。。。。求助！！！！急！！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-01-18 19:24:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

淡竹2066

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by buggiegoat at 2013-01-18 21:30:29
三个平行样品经过一个或三个镍柱？有没先统一原核样品的量（OD值）呢？ 在加试剂时有没把试剂摇均？

1.三个平行样是同一批次纯化到的蛋白，测定没什么问题，现在的问题是批次间无法平行
2.至于你说的不同批次纯化前的原核样品的量（OD值）----是菌体浓度吗?这个我倒是没有测过，还有就是每次纯化到的蛋白含量之间也有一定的差别，这个对我测定的比活力影响大吗？
3.我都是将配好的反应体系摇匀后再反应的，这个应该没问题

因为我后面还要继续做点突变寻找酶的活性中心，所以希望现在把数据做稳定方便以后参考，但是现在我的批次间无法对应，那我以后每做一个点突变都得把原始的蛋白表达一次，那样太麻烦了。。。。。
赞一下 回复此楼
3楼2013-01-19 00:14:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

buggiegoat

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
淡竹2066: 金币+1 2013-01-19 00:05:27
三个平行样品经过一个或三个镍柱？有没先统一原核样品的量（OD值）呢？ 在加试剂时有没把试剂摇均？
赞一下 回复此楼
2楼2013-01-18 21:30:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

buggiegoat

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

是的，菌体浓度。比如说你做三次实验，在纯化蛋白前，OD都调到1或你所设定的值。纯化后的蛋白，也测浓度，统一后才做活性测，如此便可知误差在那儿。希望能解惑。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
4楼2013-01-19 09:35:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

buggiegoat

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2013-01-23 16:02:19
是的，菌体浓度。比如说你做三次实验，在纯化蛋白前，OD都调到1或你所设定的值。纯化后的蛋白，也测浓度，统一后才做活性测，如此便可知误差在那儿。希望能解惑。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
5楼2013-01-19 09:40:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 280求调剂 +11 咕噜晓晓 2026-03-18 12/600 2026-03-21 22:40 by ACS Nano——
[考研] 一志愿东华大学控制学硕320求调剂 +3 Grand777 2026-03-21 3/150 2026-03-21 19:23 by 简之-
[考研] 一志愿南大，0703化学，分数336，求调剂 +3 收到VS 2026-03-21 3/150 2026-03-21 18:42 by 学员8dgXkO
[考研] 296求调剂 +4 www_q 2026-03-20 4/200 2026-03-21 17:26 by 学员8dgXkO
[考研] 298求调剂 +4 上岸6666@ 2026-03-20 4/200 2026-03-21 17:14 by 学员8dgXkO
[考研] 299求调剂 +4 某某某某位 2026-03-21 4/200 2026-03-21 16:30 by barlinike
[考研] 346求调剂[0856] +4 WayneLim327 2026-03-16 7/350 2026-03-21 04:02 by JourneyLucky
[考研] 310求调剂 +3 baibai1314 2026-03-16 3/150 2026-03-21 03:56 by JourneyLucky
[考研] 070300化学319求调剂 +7 锦鲤0909 2026-03-17 7/350 2026-03-21 03:46 by JourneyLucky
[考研] 303求调剂 +5 睿08 2026-03-17 7/350 2026-03-21 03:11 by JourneyLucky
[考研] 324分 085600材料化工求调剂 +4 llllkkkhh 2026-03-18 4/200 2026-03-21 01:24 by JourneyLucky
[考研] 一志愿华中科技大学，080502，354分求调剂 +5 守候夕阳CF 2026-03-18 5/250 2026-03-21 01:06 by JourneyLucky
[考研] 招收调剂硕士 +4 lidianxing 2026-03-19 12/600 2026-03-20 12:25 by lidianxing
[考研] 材料学硕318求调剂 +5 February_Feb 2026-03-19 5/250 2026-03-19 23:51 by 23Postgrad
[考研] 0703化学调剂 +5 pupcoco 2026-03-17 8/400 2026-03-19 13:58 by houyaoxu
[考研] 【同济软件】软件（085405）考研求调剂 +3 2026eternal 2026-03-18 3/150 2026-03-18 19:09 by 搏击518
[考研] 312求调剂 +8 陌宸希 2026-03-16 9/450 2026-03-18 12:39 by Linda Hu
[考研] 有没有道铁/土木的想调剂南林，给自己招师弟中～ +3 TqlXswl 2026-03-16 7/350 2026-03-17 15:23 by TqlXswl
[考研] 304求调剂 +5 素年祭语 2026-03-15 5/250 2026-03-16 17:00 by 我的船我的海
[考研] 0856求调剂 +3 刘梦微 2026-03-15 3/150 2026-03-16 10:00 by houyaoxu
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭