24小时热门版块排行榜    

查看: 1563  |  回复: 9
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

淡竹2066

铜虫 (小有名气)

[求助] 酶活测定问题请教

最近在做一个原核表达蛋白的酶活测定,具体是将镍柱纯化获得的蛋白通过与NADH偶联来检测其活性,为了确保实验的准确性,每次纯化的蛋白样品都做3个平行,结果没什么问题。但是不同批次纯化到的蛋白测定的酶活结果却不能很好的平行,这是为什么呢?纯化过程和酶活测定方法都是按照相同的步骤来做的。不知道有没有虫友也遇到过类似的问题。。。。求助!!!!急!!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

buggiegoat

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2013-01-23 16:02:19
是的,菌体浓度。比如说你做三次实验,在纯化蛋白前,OD都调到1或你所设定的值。纯化后的蛋白,也测浓度,统一后才做活性测,如此便可知误差在那儿。希望能解惑。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
5楼2013-01-19 09:40:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

buggiegoat

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
淡竹2066: 金币+1 2013-01-19 00:05:27
三个平行样品经过一个或三个镍柱?有没先统一原核样品的量(OD值)呢? 在加试剂时有没把试剂摇均?
2楼2013-01-18 21:30:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

淡竹2066

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by buggiegoat at 2013-01-18 21:30:29
三个平行样品经过一个或三个镍柱?有没先统一原核样品的量(OD值)呢? 在加试剂时有没把试剂摇均?

1.三个平行样是同一批次纯化到的蛋白,测定没什么问题,现在的问题是批次间无法平行
2.至于你说的不同批次纯化前的原核样品的量(OD值)----是菌体浓度吗?这个我倒是没有测过,还有就是每次纯化到的蛋白含量之间也有一定的差别,这个对我测定的比活力影响大吗?
3.我都是将配好的反应体系摇匀后再反应的,这个应该没问题

因为我后面还要继续做点突变寻找酶的活性中心,所以希望现在把数据做稳定方便以后参考,但是现在我的批次间无法对应,那我以后每做一个点突变都得把原始的蛋白表达一次,那样太麻烦了。。。。。
3楼2013-01-19 00:14:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

buggiegoat

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

是的,菌体浓度。比如说你做三次实验,在纯化蛋白前,OD都调到1或你所设定的值。纯化后的蛋白,也测浓度,统一后才做活性测,如此便可知误差在那儿。希望能解惑。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
4楼2013-01-19 09:35:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 284求调剂 +8 天下熯 2026-02-28 8/400 2026-03-02 00:15 by 暮雨星晴
[基金申请] 本子写完了,给DS兄弟看了,得了92分 +3 Doma 2026-03-01 7/350 2026-03-02 00:00 by jnzsy
[考研] 一志愿郑大材料学硕298分,求调剂 +5 wsl111 2026-03-01 5/250 2026-03-01 23:45 by 暮雨星晴
[考研] 材料化工调剂 +12 今夏不夏 2026-03-01 13/650 2026-03-01 23:32 by L135790
[考研] 江苏省农科院招调剂1名 +3 Qwertyuop 2026-03-01 3/150 2026-03-01 23:18 by aaadim
[考研] 0854复试调剂 276 +3 wmm9 2026-03-01 3/150 2026-03-01 23:13 by 热情沙漠
[考研] 265分求调剂不调专业和学校有行学上就 +6 礼堂丁真258 2026-02-28 8/400 2026-03-01 22:50 by jian_
[考研] 材料类求调剂 +10 wana_kiko 2026-02-28 12/600 2026-03-01 22:10 by 海嵙Y
[考研] 高分子化学与物理调剂 +6 好好好1233 2026-02-28 12/600 2026-03-01 19:48 by 好好好1233
[考研] 0856化工专硕求调剂 +12 董boxing 2026-03-01 12/600 2026-03-01 19:45 by 材子momo
[考研] 0857调剂 +3 一ll半 2026-02-28 3/150 2026-03-01 18:32 by 热情沙漠
[考研] 328求调剂 +3 aaadim 2026-03-01 5/250 2026-03-01 17:29 by njzyff
[考研] 281求调剂 +4 2026计算机_诚心 2026-03-01 7/350 2026-03-01 17:20 by 2026计算机_诚心
[考研] 化工专硕342,一志愿大连理工大学,求调剂 +3 kyf化工 2026-02-28 4/200 2026-03-01 16:49 by yywzz
[考研] 304求调剂 +6 曼殊2266 2026-02-28 7/350 2026-03-01 15:14 by wjLi2017
[考研] 材料工程274求调剂 +3 Lilithan 2026-03-01 3/150 2026-03-01 14:58 by ms629
[考研] 求调剂 +6 repeatt?t 2026-02-28 6/300 2026-03-01 14:37 by Sakura绘
[硕博家园] 2025届双非化工硕士毕业,申博 +3 更多的是 2026-02-27 4/200 2026-03-01 10:04 by ztg729
[考研] 材料调剂 +4 爱擦汗的可乐冰 2026-02-28 4/200 2026-03-01 00:38 by 猫猫球alter
[基金申请] 面上模板改不了页边距吧? +5 ieewxg 2026-02-25 6/300 2026-03-01 00:10 by addressing
信息提示
请填处理意见