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sunnywill

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[求助] 植物PAL及CAT两种酶测定中遇到的问题已有1人参与

最近在测植物PAL及CAT酶活，遇到了些问题，在此向有经验的高手请教下经验。希望高手能给予详解
PAL测定的方法中有一种是：加苯丙氨酸与酶提取液后，立即保温于30度15分钟后，加200微升6M的HCl终止反应，在于290nm处测定吸光值变化。最终以吸光值每30分钟或每小时变化0.01为一个酶活力单位。
我的疑问是加酸终止反应了，那么吸光值还会有变化吗？是逐渐增加还是减小呢？不应该是固定值吗
而有些方法是不加酸终止反应的，

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1楼 2012-06-02 12:10:46

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新虫 (初入文坛)

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【答案】应助回帖

不知道为什么，我在测的时候发现吸光度是下降的。。。。但是试验方法上写的是因为反应生成了反式肉桂酸而吸光度上升的啊……想问一下各位虫友有没有遇到过这种状况

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7楼2013-06-21 18:36:04

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sunnywill

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引用回帖:

3楼: Originally posted by starseacow at 2012-06-02 16:55:05
你所提到的PAL测定，实际上是在保温15分钟后，测定样品290nm吸光度值，以及不加样品对照组吸光度值，两者差值即吸光度值在15分钟内变化，根据这个计算半小时或一小时变化值并换算为活力单位。那个每半小时或一小时变 ...

PAL测定中，是每个样品都有对照吗？你指不加样品对照组吸光度值是指不加苯丙氨酸，而用缓冲液代替苯丙氨酸，同样加酶粗提液吗？这样加入有10个植物样品，是就要设10个对照组吗？

我在实验时只设了不加苯丙氨酸，而用缓冲液代替苯丙氨酸的，作为对照调零了，所以没有你所说的两者差值

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5楼2012-06-02 20:49:31

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