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sunnywill

金虫 (正式写手)

[求助] 植物PAL及CAT两种酶测定中遇到的问题 已有1人参与

最近在测植物PAL及CAT酶活,遇到了些问题,在此向有经验的高手请教下经验。希望高手能给予详解
PAL测定的方法中有一种是:加苯丙氨酸与酶提取液后,立即保温于30度15分钟后,加200微升6M的HCl终止反应,在于290nm处测定吸光值变化。最终以吸光值每30分钟或每小时变化0.01为一个酶活力单位。
我的疑问是加酸终止反应了,那么吸光值还会有变化吗?是逐渐增加还是减小呢?不应该是固定值吗
而有些方法是不加酸终止反应的,
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
amisking: 金币+2, 鼓励发帖帮助解答问题。 2012-06-02 19:31:54
你所提到的PAL测定,实际上是在保温15分钟后,测定样品290nm吸光度值,以及不加样品对照组吸光度值,两者差值即吸光度值在15分钟内变化,根据这个计算半小时或一小时变化值并换算为活力单位。那个每半小时或一小时变化0.01只是活力单位的定义方式,并非实验过程。
植物生理群69993869,为避免广告,申请加入请提供木虫昵称,院校及专业信息
3楼2012-06-02 16:55:05
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sunnywill

金虫 (正式写手)

希望亲自做过该实验的高手给予详细解答
2楼2012-06-02 12:27:04
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sunnywill

金虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by starseacow at 2012-06-02 16:55:05
你所提到的PAL测定,实际上是在保温15分钟后,测定样品290nm吸光度值,以及不加样品对照组吸光度值,两者差值即吸光度值在15分钟内变化,根据这个计算半小时或一小时变化值并换算为活力单位。那个每半小时或一小时变 ...

多谢啦,原来一直理解的以为吸光值变化0.01为一个酶活力单位是要作动态变化,每隔一定时间测定。
4楼2012-06-02 20:39:21
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sunnywill

金虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by starseacow at 2012-06-02 16:55:05
你所提到的PAL测定,实际上是在保温15分钟后,测定样品290nm吸光度值,以及不加样品对照组吸光度值,两者差值即吸光度值在15分钟内变化,根据这个计算半小时或一小时变化值并换算为活力单位。那个每半小时或一小时变 ...

PAL测定中,是每个样品都有对照吗?你指不加样品对照组吸光度值是指不加苯丙氨酸,而用缓冲液代替苯丙氨酸,同样加酶粗提液吗?这样加入有10个植物样品,是就要设10个对照组吗?

我在实验时只设了不加苯丙氨酸,而用缓冲液代替苯丙氨酸的,作为对照调零了,所以没有你所说的两者差值
5楼2012-06-02 20:49:31
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