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sstefsun0630

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[求助] 植物蛋白提取及酶活测定中遇到的若干问题已有3人参与

事情是这样的，因为需要测定CAT，SOD活性等其他实验，我需要提取植物蛋白：
我取了新鲜的植株（绿色植物小苗），用液氮磨碎后，加入蛋白提取液（试剂盒），混匀（我用了下涡旋机20秒左右），冰上孵育20——30分钟。然后16000转4度离心20分钟。
结果我的上清是一种棕褐色的液体，这是正常的么？不是应该差不多是浅浅的绿色？
由于一些原因我没能当时就测酶活，而是等了一个半小时。担心酶活性受到影响，我把我的样品放在了冰上（0度左右）。在测酶活之前放置室温环境（大概20度左右。结果测酶活的时候发现竟然几乎没有变化。而且我的样品在波长270 nm左右有较强的吸收，所以应该是这个影响了我酶活的测定。

所以，请问这种状况怎么破？我是哪里做的有问题么？求解答困惑~~~
谢谢！谢谢！！！

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1楼 2014-01-09 01:36:19

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lp_0820

木虫 (著名写手)

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【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

这两天我带着师弟师妹也在测定这个几个酶的活性，我们用的是磷酸缓冲液进行研磨。可溶性蛋白的提取方法和酶提取方法一致，然后用考马斯亮蓝测蛋白含量。SOD,POD,CAT的测定也都没什么问题。

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3楼2014-01-10 13:45:35

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sstefsun0630

金虫 (小有名气)

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有木有人可以帮忙解答一下~~~

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2楼2014-01-09 08:50:52

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sstefsun0630

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引用回帖:

3楼: Originally posted by lp_0820 at 2014-01-10 13:45:35
这两天我带着师弟师妹也在测定这个几个酶的活性，我们用的是磷酸缓冲液进行研磨。可溶性蛋白的提取方法和酶提取方法一致，然后用考马斯亮蓝测蛋白含量。SOD,POD,CAT的测定也都没什么问题。

我测的植物叶片，按道理来说上清应该是绿色的，我的却是棕褐色，不知道是出了什么问题~~~

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4楼2014-01-11 12:35:33

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