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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 细胞碎片中蛋白的提取测定方法
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laozuzunzhe

铁杆木虫 (著名写手)

[求助] 细胞碎片中蛋白的提取测定方法

在细胞蛋白测定实验中，我打算用细胞破碎后，没溶解的碎片中疏水蛋白跑电泳，大概记得有一个蛋白手册上有相关处理方法，好像是用一种蛋白酶来裂解，现在找不到了，麻烦谁清楚这个实验过程的，或是有该实验文档的指导一下。非常感谢！！！
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1楼 2013-03-30 10:46:02
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tianchi2952

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
什么细胞，动植物还是微生物细胞，还有真核原核细胞膜蛋白的提取方法是不同的......你这试验是什么目的，目的不同方法也不同.......麻烦问的专业一点哈......
如果纯化膜蛋白还要保持其高级结构和活性的话就麻烦一些，如果只是将它裂解消化掉那就容易多了......
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益学善用
2楼2013-03-30 11:38:59
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laozuzunzhe

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by tianchi2952 at 2013-03-30 11:38:59
什么细胞，动植物还是微生物细胞，还有真核原核细胞膜蛋白的提取方法是不同的......你这试验是什么目的，目的不同方法也不同.......麻烦问的专业一点哈......
如果纯化膜蛋白还要保持其高级结构和活性的话就麻烦一 ...

要大肠杆菌超声破碎后碎片中的蛋白，我要分析离心后，沉淀的碎片中和上清中蛋白的变化，需要跑电泳，但是现在不知道怎么处理碎片来得到蛋白，我记得好像是用酶处理，在冰上做的。你知道详细的具体步奏或能提供一个操作步奏不？谢谢
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3楼2013-03-30 11:50:59
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tianchi2952

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
laozuzunzhe: 金币+10, ★★★很有帮助, 谢谢！ 2013-03-30 15:11:44
菌体超声破碎后，细胞内所有蛋白质基本上都混在了一起，种类多且杂，不好分离纯化，大肠杆菌是阴性菌，肽聚糖含量少，大部分是糖类，脂类物质，用消化脂类的酶基本上就能处理掉，关键是使用酶解的话就引入了新的蛋白质，至于用什么酶的话那我就不清楚了，没做过，个人意见，无数据支持。
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益学善用
4楼2013-03-30 14:47:42
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laozuzunzhe

铁杆木虫 (著名写手)
5楼2013-04-01 20:05:12
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laozuzunzhe

铁杆木虫 (著名写手)
没有人知道么？？？好像是bio-rad的一个蛋白手册，提到在冰上操作，用酶解大肠杆菌超声破碎后的碎片。急求！！！哪位高人知道呢？
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6楼2013-04-01 22:13:34
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toxicpeach

木虫 (正式写手)
溶菌酶么？好像是不要超声的
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海纳百川有容乃大，壁立千尺无欲则刚
7楼2013-05-05 22:28:03
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laozuzunzhe

铁杆木虫 (著名写手)
嗯，找到这个手册了，是溶菌酶，但是要超声处理，是QIAGEN（凯杰）公司一个手册中的。
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8楼2013-05-06 13:22:22
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