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laozuzunzhe

铁杆木虫 (著名写手)

[求助] 细胞碎片中蛋白的提取测定方法

在细胞蛋白测定实验中,我打算用细胞破碎后,没溶解的碎片中疏水蛋白跑电泳,大概记得有一个蛋白手册上有相关处理方法,好像是用一种蛋白酶来裂解,现在找不到了,麻烦谁清楚这个实验过程的,或是有该实验文档的指导一下。非常感谢!!!
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tianchi2952

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
什么细胞,动植物还是微生物细胞,还有真核原核细胞膜蛋白的提取方法是不同的......你这试验是什么目的,目的不同方法也不同.......麻烦问的专业一点哈......
如果纯化膜蛋白还要保持其高级结构和活性的话就麻烦一些,如果只是将它裂解消化掉那就容易多了......
益学善用
2楼2013-03-30 11:38:59
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laozuzunzhe

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by tianchi2952 at 2013-03-30 11:38:59
什么细胞,动植物还是微生物细胞,还有真核原核细胞膜蛋白的提取方法是不同的......你这试验是什么目的,目的不同方法也不同.......麻烦问的专业一点哈......
如果纯化膜蛋白还要保持其高级结构和活性的话就麻烦一 ...

要大肠杆菌超声破碎后碎片中的蛋白,我要分析离心后,沉淀的碎片中和上清中蛋白的变化,需要跑电泳,但是现在不知道怎么处理碎片来得到蛋白,我记得好像是用酶处理,在冰上做的。你知道详细的具体步奏或能提供一个操作步奏不?谢谢
3楼2013-03-30 11:50:59
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tianchi2952

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
laozuzunzhe: 金币+10, ★★★很有帮助, 谢谢! 2013-03-30 15:11:44
菌体超声破碎后,细胞内所有蛋白质基本上都混在了一起,种类多且杂,不好分离纯化,大肠杆菌是阴性菌,肽聚糖含量少,大部分是糖类,脂类物质,用消化脂类的酶基本上就能处理掉,关键是使用酶解的话就引入了新的蛋白质,至于用什么酶的话那我就不清楚了,没做过,个人意见,无数据支持。
益学善用
4楼2013-03-30 14:47:42
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laozuzunzhe

铁杆木虫 (著名写手)

5楼2013-04-01 20:05:12
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laozuzunzhe

铁杆木虫 (著名写手)

没有人知道么???好像是bio-rad的一个蛋白手册,提到在冰上操作,用酶解大肠杆菌超声破碎后的碎片。急求!!!哪位高人知道呢?
6楼2013-04-01 22:13:34
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toxicpeach

木虫 (正式写手)

溶菌酶么?好像是不要超声的
海纳百川有容乃大,壁立千尺无欲则刚
7楼2013-05-05 22:28:03
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laozuzunzhe

铁杆木虫 (著名写手)

嗯,找到这个手册了,是溶菌酶,但是要超声处理,是QIAGEN(凯杰)公司一个手册中的。
8楼2013-05-06 13:22:22
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