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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 动植物 » 综合其他 » 关于测定植物CAT的问题
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liangyou

铁杆木虫 (著名写手)

[求助] 关于测定植物CAT的问题

本人用紫外分光光度法中的连续记录法测定过氧化氢酶的活力，但是每隔30秒测得的值如下：1.520，1.520，1.515，1.517，1.519，1.518。
测了近百组数据，都是这样的不稳定，而且变化值极小，POD和SOD数据测出来还都是正常的，可不可以求助一下大家，为什么会出现这个情况！
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1楼 2012-01-19 20:27:52
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回帖置顶 ( 共有1个 )

starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
liangyou(金币+10): ★★★很有帮助 我要去看看实验真正的结果，可不可以把你的实验方案发给我下啊，谢谢了！ 2012-01-27 00:43:21
amisking(APEPI+1): 鼓励积极应助！ 2012-01-27 17:38:07
你的CAT反应液组成是什么？加入粗酶液后有没充分混合？
你可以按照不安的-heart 的建议试试，但你同时在棉花与龙葵中遇到这样的问题，我怀疑还有别的某步操作有问题。

我过去做黄花蒿植株及发根的CAT检测，方法参考Zhou B et al.  J Exp Bot, 2005, 56: 3223-3228
酶提取：取不同处理的新鲜黄花蒿发根0.500 g，在4 ml预冷的磷酸钾酶提取缓冲液中冰浴研磨，10000 r/min 4℃离心15 min，取上清液作为酶待测液。
检测：取0.1 ml待测酶液，加入0.05 mol/l pH 7.0磷酸钾缓冲液1.4 ml，40 mmol/l H2O2 1.5 ml，立即计时，测定波长240 nm处吸光度值，每隔30 s读数一次，共测定4 min。以不含酶待测液作为空白对照。CAT活力以ΔA240/Δt=0.001/min为一个酶活力单位（U），比活力为U/mg蛋白。
（磷酸钾酶提取缓冲液：0.05 mol/l pH 7.0磷酸钾缓冲液中，含1%（w/v）聚乙烯吡咯烷酮，1 mmol/l苯甲磺酰氯，1 mmol/l EDTA，1mmol/l DTT与0.2% Triton X-100。）
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小精灵12
植物生理群69993869，为避免广告，申请加入请提供木虫昵称，院校及专业信息
11楼2012-01-20 22:20:39
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普通回帖

starseacow

专家顾问 (职业作家)
楼主需要提供更详细的信息，你的测定体系是什么？
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植物生理群69993869，为避免广告，申请加入请提供木虫昵称，院校及专业信息
2楼2012-01-19 23:22:57
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liangyou

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
楼: Originally posted by starseacow at 2012-01-19 23:22:57:
楼主需要提供更详细的信息，你的测定体系是什么？

我测定的是棉花和龙葵，都是一样不稳定，上面的一个数据只是比较典型！
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3楼2012-01-20 01:03:08
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0610616

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
样品选择有差异吗？在样品提取过程中如果处理不当，可能发生降解
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Everythingisok!
4楼2012-01-20 09:55:59
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liangyou

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
楼: Originally posted by 0610616 at 2012-01-20 09:55:59:
样品选择有差异吗？在样品提取过程中如果处理不当，可能发生降解

可不可以说明一下，什么样的情况下会发生降解！
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5楼2012-01-20 10:11:28
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郭继波

荣誉版主 (文学泰斗)

神龍教梦家园的小百姓-波波

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
是不是测试的时间太长了 还有就是注意分解和反应的问题
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菩提本无树，明镜亦非台。
6楼2012-01-20 14:46:27
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liangyou

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
楼: Originally posted by 郭继波 at 2012-01-20 14:46:27:
是不是测试的时间太长了 还有就是注意分解和反应的问题

嗯，估计过氧化氢酶太容易分解了，谢谢了！
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7楼2012-01-20 17:36:22
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starseacow

专家顾问 (职业作家)
引用回帖:
3楼: Originally posted by liangyou at 2012-01-20 01:03:08:
我测定的是棉花和龙葵，都是一样不稳定，上面的一个数据只是比较典型！

楼主误会我的意思了，我想知道你在多少毫升体系内测定，使用多少H2O2，多少样品，测定CAT与POD等其他几个成功的酶是否使用同一批样品等等？只有尽可能提供关于你试验的详细信息，别人才好帮助你找出问题所在。
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植物生理群69993869，为避免广告，申请加入请提供木虫昵称，院校及专业信息
8楼2012-01-20 18:07:48
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不安的-heart

新虫 (初入文坛)
我们测西蒙得木的时候也出现过这种变化不明显的情况，查资料说的是因为植物本身体内的CAT被一种物质包裹起来了。然后我们在研磨液里面加了曲拉通之后，数据正常了
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生命在于拼搏、创造、奉献
9楼2012-01-20 20:46:52
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liangyou

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
楼: Originally posted by starseacow at 2012-01-20 18:07:48:
楼主误会我的意思了，我想知道你在多少毫升体系内测定，使用多少H2O2，多少样品，测定CAT与POD等其他几个成功的酶是否使用同一批样品等等？只有尽可能提供关于你试验的详细信息，别人才好帮助你找出问题所在。

我用的是三毫升的体系在光径为 1cm 的石英比色皿内，先加入 3mL CAT 反应液，再加 0.1mL 的粗酶液立即把石英比色皿插入比色架上，关盖，同时将记录仪的纸速开关拨至 4mm/min 处，A240 的变化情况被记录于纸上。3min 后关闭纸速开关。用的都是同一样品，只是测定的时间不一样！
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10楼2012-01-20 20:55:26
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