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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 动植物 » 综合其他 » 关于测定植物CAT的问题
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starseacow

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【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
liangyou(金币+10): ★★★很有帮助 我要去看看实验真正的结果，可不可以把你的实验方案发给我下啊，谢谢了！ 2012-01-27 00:43:21
amisking(APEPI+1): 鼓励积极应助！ 2012-01-27 17:38:07
你的CAT反应液组成是什么？加入粗酶液后有没充分混合？
你可以按照不安的-heart 的建议试试，但你同时在棉花与龙葵中遇到这样的问题，我怀疑还有别的某步操作有问题。

我过去做黄花蒿植株及发根的CAT检测，方法参考Zhou B et al.  J Exp Bot, 2005, 56: 3223-3228
酶提取：取不同处理的新鲜黄花蒿发根0.500 g，在4 ml预冷的磷酸钾酶提取缓冲液中冰浴研磨，10000 r/min 4℃离心15 min，取上清液作为酶待测液。
检测：取0.1 ml待测酶液，加入0.05 mol/l pH 7.0磷酸钾缓冲液1.4 ml，40 mmol/l H2O2 1.5 ml，立即计时，测定波长240 nm处吸光度值，每隔30 s读数一次，共测定4 min。以不含酶待测液作为空白对照。CAT活力以ΔA240/Δt=0.001/min为一个酶活力单位（U），比活力为U/mg蛋白。
（磷酸钾酶提取缓冲液：0.05 mol/l pH 7.0磷酸钾缓冲液中，含1%（w/v）聚乙烯吡咯烷酮，1 mmol/l苯甲磺酰氯，1 mmol/l EDTA，1mmol/l DTT与0.2% Triton X-100。）
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小精灵12
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11楼2012-01-20 22:20:39
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liangyou

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
楼: Originally posted by 不安的-heart at 2012-01-20 20:46:52:
我们测西蒙得木的时候也出现过这种变化不明显的情况，查资料说的是因为植物本身体内的CAT被一种物质包裹起来了。然后我们在研磨液里面加了曲拉通之后，数据正常了

我们这个不太清楚，应该不是物质包裹的问题！
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12楼2012-01-21 08:44:18
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liangyou

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
楼: Originally posted by starseacow at 2012-01-20 22:20:39:
你的CAT反应液组成是什么？加入粗酶液后有没充分混合？
你可以按照不安的-heart 的建议试试，但你同时在棉花与龙葵中遇到这样的问题，我怀疑还有别的某步操作有问题。

我过去做黄花蒿植株及发根的CAT检测，方 ...

嗯，好，这再做的时候去看看，谢谢您了！
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13楼2012-01-21 19:58:45
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小精灵12

铁虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
11楼: Originally posted by starseacow at 2012-01-20 22:20:39
你的CAT反应液组成是什么？加入粗酶液后有没充分混合？
你可以按照不安的-heart 的建议试试，但你同时在棉花与龙葵中遇到这样的问题，我怀疑还有别的某步操作有问题。

我过去做黄花蒿植株及发根的CAT检测，方法 ...

请问，我做龙须菜SOD活性测定，在提取液中加入4%的聚乙烯吡咯烷酮，0.3%曲拉通，50 mmol/l pH7.0磷酸钾缓冲液，测定出来的对照值比样品值小，这是怎么回事呢？
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14楼2013-07-01 11:17:34
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starseacow

专家顾问 (职业作家)
引用回帖:
14楼: Originally posted by 小精灵12 at 2013-07-01 11:17:34
请问，我做龙须菜SOD活性测定，在提取液中加入4%的聚乙烯吡咯烷酮，0.3%曲拉通，50 mmol/l pH7.0磷酸钾缓冲液，测定出来的对照值比样品值小，这是怎么回事呢？...

首先检查所有试剂是否没有问题。
其次，可以试试在最终检测体系中加大样品用量。
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15楼2013-07-01 16:16:22
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风惜春

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
11楼: Originally posted by starseacow at 2012-01-20 22:20:39
你的CAT反应液组成是什么？加入粗酶液后有没充分混合？
你可以按照不安的-heart 的建议试试，但你同时在棉花与龙葵中遇到这样的问题，我怀疑还有别的某步操作有问题。

我过去做黄花蒿植株及发根的CAT检测，方法 ...

请问 测CAT时候  如果反应液中H2O2的浓度过高  那这样对实验的影响是怎么样呢  麻烦了
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16楼2013-12-24 00:05:21
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starseacow

专家顾问 (职业作家)
引用回帖:
16楼: Originally posted by 风惜春 at 2013-12-24 00:05:21
请问 测CAT时候  如果反应液中H2O2的浓度过高  那这样对实验的影响是怎么样呢  麻烦了...

可能最后测得的OD值过高，超出分光光度计可信范围，测出来的结果也就不准
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17楼2013-12-24 17:59:59
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蓝天32112398

新虫 (初入文坛)
你可以减少过氧化氢的加入量试一试，看看反应的效果，有时过氧化氢的浓度会影响测定值。而且吸光度介于0.2-0.8之间时，值是比较准确的。且反应的红星的变化值在前15s时反应较大。希望有帮助
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18楼2014-08-17 20:59:10
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iFaner

金虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 不安的-heart at 2012-01-20 20:46:52
我们测西蒙得木的时候也出现过这种变化不明显的情况，查资料说的是因为植物本身体内的CAT被一种物质包裹起来了。然后我们在研磨液里面加了曲拉通之后，数据正常了

曲拉通的目的是什么

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19楼2015-09-18 00:34:22
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limao35

禁虫 (初入文坛)
本帖内容被屏蔽
20楼2015-09-28 15:49:10
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