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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 动植物 » 综合其他 » CAT POD SOD测定中提取液的问题
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boluodehai

新虫 (初入文坛)

[求助] CAT POD SOD测定中提取液的问题 已有2人参与

各位大侠 小弟最最近做昆虫中SOD POD 和CAT 活力的测定 因为样品比较难取（周期较长），所以想用一份粗酶提取液测定这三种酶的活性，不知是否可行。另外 我们实验室以前测这三种酶都是分别提取的。同时用一份酶液测没有试过。如果我用PBS提，后面反应体系中是用不同PH的PBS还是其他缓冲液? 提取粗酶的PBS用7.8的还是7的？影响大不大？问题比较乱，诸位见谅
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1楼 2013-05-31 16:54:17
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
做植物测抗氧化酶时可以用同一份粗酶提取液测定不同酶活性，不同的酶最终反应体系仍是按照方法建议用相应PH缓冲液，那点样品加进去对体系PH影响有限。
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2楼2013-05-31 18:40:05
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普通回帖

boluodehai

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by starseacow at 2013-05-31 18:40:05
做植物测抗氧化酶时可以用同一份粗酶提取液测定不同酶活性，不同的酶最终反应体系仍是按照方法建议用相应PH缓冲液，那点样品加进去对体系PH影响有限。

谢谢！
“建议用相应PH缓冲液”是指参考文献中其他缓冲液还是相应PH的PBS缓冲液？不同缓冲液会不会冲突？
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3楼2013-05-31 19:23:22
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by boluodehai at 2013-05-31 19:23:22
谢谢！
“建议用相应PH缓冲液”是指参考文献中其他缓冲液还是相应PH的PBS缓冲液？不同缓冲液会不会冲突？...

指你参考的酶测定方法文献中，对于测定体系要求的缓冲液。不同缓冲液发生冲突的可能性不大，尤其是你提取时用PBS。
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4楼2013-05-31 20:58:34
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boluodehai

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by starseacow at 2013-05-31 20:58:34
指你参考的酶测定方法文献中，对于测定体系要求的缓冲液。不同缓冲液发生冲突的可能性不大，尤其是你提取时用PBS。...

哦 这样啊 谢谢
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5楼2013-06-01 12:53:12
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boluodehai

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by starseacow at 2013-05-31 20:58:34
指你参考的酶测定方法文献中，对于测定体系要求的缓冲液。不同缓冲液发生冲突的可能性不大，尤其是你提取时用PBS。...

大侠 我看了你好多的帖子，你真好厉害，也很热心。我想再问一下， 一般PBS提取液用什么摩尔浓度和PH的呢？不同浓度和PH对酶的提取影响大不大呢？我看文献中不同家用的都不太一样啊
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6楼2013-06-01 17:28:06
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by boluodehai at 2013-06-01 17:28:06
大侠 我看了你好多的帖子，你真好厉害，也很热心。我想再问一下， 一般PBS提取液用什么摩尔浓度和PH的呢？不同浓度和PH对酶的提取影响大不大呢？我看文献中不同家用的都不太一样啊...

对于不同酶在不同文章中有不同的PH和浓度要求，甚至有时候同一个酶在不同文章中提取缓冲液也不同。我认为最佳方案就是找一篇可信的文章，参考上面适合于尽可能多酶提取的缓冲液（PH差0.1-0.2我感觉影响不大，浓度50 mmol/l和100 mmol/l也没太大区别），另外就是适当做点预实验。
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7楼2013-06-01 19:30:29
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num20062622

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
影响不大 ..
可以用一种提取液提取..
很多人都是用一种提取液提然后测的.
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8楼2013-06-02 09:48:25
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boluodehai

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by starseacow at 2013-06-01 19:30:29
对于不同酶在不同文章中有不同的PH和浓度要求，甚至有时候同一个酶在不同文章中提取缓冲液也不同。我认为最佳方案就是找一篇可信的文章，参考上面适合于尽可能多酶提取的缓冲液（PH差0.1-0.2我感觉影响不大，浓度5 ...

谢谢大侠，以后还可能麻烦你
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9楼2013-06-02 22:18:41
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boluodehai

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by num20062622 at 2013-06-02 09:48:25
影响不大 ..
可以用一种提取液提取..
很多人都是用一种提取液提然后测的.

哦 谢谢 啊
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10楼2013-06-02 22:19:43
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