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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 动植物 » 综合其他 » CAT POD SOD测定中提取液的问题
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kgyl110

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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2楼: Originally posted by starseacow at 2013-05-31 18:40:05
做植物测抗氧化酶时可以用同一份粗酶提取液测定不同酶活性，不同的酶最终反应体系仍是按照方法建议用相应PH缓冲液，那点样品加进去对体系PH影响有限。

我想问一下，你的意思是说研磨时候甚至提取时候的几毫升缓冲液对样本内酶活性没有太大的影响么？而且我看的生理学实验指导的书上提取SOD的缓冲液是碱性的，而提取POD的溶液是酸性的，这也可以用同一个缓冲液么？如果我用提取SOD的酶活性的酶液来测定POD的话，这怎么计算其样本重量呢，因为提取液被一分为二，而且不均匀，还是说只要每个样本取相同体积的酶提取液就可以，这样的话方便比较，但是不能准确测定出样本中的酶活性。
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11楼2014-07-13 22:25:13
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starseacow

专家顾问 (职业作家)
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11楼: Originally posted by kgyl110 at 2014-07-13 22:25:13
我想问一下，你的意思是说研磨时候甚至提取时候的几毫升缓冲液对样本内酶活性没有太大的影响么？而且我看的生理学实验指导的书上提取SOD的缓冲液是碱性的，而提取POD的溶液是酸性的，这也可以用同一个缓冲液么？如 ...

我使用磷酸盐研磨缓冲液冰浴条件下研磨提取酶蛋白。提取样品可以用于不同抗氧化酶活性测定。我个人认为比较重要的是检测体系pH值，提取缓冲液影响并不大（至少我的预实验中用不同pH值缓冲液提取黄花蒿发根，测定POD，CAT和SOD影响不大）。最终酶活我用U/mg 蛋白计算，对于同一样品，可以用来测定蛋白含量，及不同酶活性。
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12楼2014-07-13 22:45:49
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kgyl110

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

真是实验专家，做了那么多的实验来验证不同的情况。你说的检测体系是指提取液提取之后另外再加入的缓冲液么？专业的词汇不太懂，那么计算时候的鲜重如何计算呢？是把同一份酶液分为了好几份儿，那就不能在计算时去研磨时的鲜重了吧
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13楼2014-07-13 22:59:01
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
13楼: Originally posted by kgyl110 at 2014-07-13 22:59:01
真是实验专家，做了那么多的实验来验证不同的情况。你说的检测体系是指提取液提取之后另外再加入的缓冲液么？专业的词汇不太懂，那么计算时候的鲜重如何计算呢？是把同一份酶液分为了好几份儿，那就不能在计算时去研 ...

这些预实验是做研究生的时候，周末没事解闷用的。检测体系指酶活测定时用的缓冲液。
我都是用U/mg蛋白计算酶活性，研磨时鲜重的差别就不用担心了。
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14楼2014-07-15 03:52:50
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最帅的超超

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by starseacow at 2013-05-31 18:40:05
做植物测抗氧化酶时可以用同一份粗酶提取液测定不同酶活性，不同的酶最终反应体系仍是按照方法建议用相应PH缓冲液，那点样品加进去对体系PH影响有限。

说的似是而非的，不通俗易懂
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15楼2020-01-07 12:29:43
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