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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 植物PAL及CAT两种酶测定中遇到的问题
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sunnywill

金虫 (正式写手)

[求助] 植物PAL及CAT两种酶测定中遇到的问题 已有1人参与

最近在测植物PAL及CAT酶活，遇到了些问题，在此向有经验的高手请教下经验。希望高手能给予详解
PAL测定的方法中有一种是：加苯丙氨酸与酶提取液后，立即保温于30度15分钟后，加200微升6M的HCl终止反应，在于290nm处测定吸光值变化。最终以吸光值每30分钟或每小时变化0.01为一个酶活力单位。
我的疑问是加酸终止反应了，那么吸光值还会有变化吗？是逐渐增加还是减小呢？不应该是固定值吗
而有些方法是不加酸终止反应的，
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1楼 2012-06-02 12:10:46
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sunnywill

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by starseacow at 2012-06-02 16:55:05
你所提到的PAL测定，实际上是在保温15分钟后，测定样品290nm吸光度值，以及不加样品对照组吸光度值，两者差值即吸光度值在15分钟内变化，根据这个计算半小时或一小时变化值并换算为活力单位。那个每半小时或一小时变 ...

多谢啦，原来一直理解的以为吸光值变化0.01为一个酶活力单位是要作动态变化，每隔一定时间测定。
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4楼2012-06-02 20:39:21
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sunnywill

金虫 (正式写手)
希望亲自做过该实验的高手给予详细解答
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2楼2012-06-02 12:27:04
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+2, 鼓励发帖帮助解答问题。 2012-06-02 19:31:54
你所提到的PAL测定，实际上是在保温15分钟后，测定样品290nm吸光度值，以及不加样品对照组吸光度值，两者差值即吸光度值在15分钟内变化，根据这个计算半小时或一小时变化值并换算为活力单位。那个每半小时或一小时变化0.01只是活力单位的定义方式，并非实验过程。
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植物生理群69993869，为避免广告，申请加入请提供木虫昵称，院校及专业信息
3楼2012-06-02 16:55:05
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sunnywill

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by starseacow at 2012-06-02 16:55:05
你所提到的PAL测定，实际上是在保温15分钟后，测定样品290nm吸光度值，以及不加样品对照组吸光度值，两者差值即吸光度值在15分钟内变化，根据这个计算半小时或一小时变化值并换算为活力单位。那个每半小时或一小时变 ...

PAL测定中，是每个样品都有对照吗？你指不加样品对照组吸光度值是指不加苯丙氨酸，而用缓冲液代替苯丙氨酸，同样加酶粗提液吗？这样加入有10个植物样品，是就要设10个对照组吗？

我在实验时只设了不加苯丙氨酸，而用缓冲液代替苯丙氨酸的，作为对照调零了，所以没有你所说的两者差值
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5楼2012-06-02 20:49:31
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