24小时热门版块排行榜    

查看: 1357  |  回复: 7

helu010924

铁虫 (小有名气)

[求助] 关于引物设计的问题

我想问一下,我已经知道了一个基因的全基因组序列,想要扩增出全长,怎么设计一对引物,就一对引物。怎么弄?用什么软件,希望步骤越详细越好。从3‘UTR 区和5’UTR区怎么弄。急,谢谢
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

宁愿笑着流泪,不愿哭着后悔
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
不知道你克隆基因的目的。如果是做表达的话,直接从起始密码子到终止密码子就可以了,不用管5'UTR和3'UTR。如果是原核生物的话,一对引物以基因组DNA为模板直接P。如果是真核生物有内含子的,需要以cDNA为模板P。
2楼2013-01-16 14:17:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

helu010924

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-16 14:17:12
不知道你克隆基因的目的。如果是做表达的话,直接从起始密码子到终止密码子就可以了,不用管5'UTR和3'UTR。如果是原核生物的话,一对引物以基因组DNA为模板直接P。如果是真核生物有内含子的,需要以cDNA为模板P。

是谷子里的某个基因。是要把全基因组扩增出来。
宁愿笑着流泪,不愿哭着后悔
3楼2013-01-16 14:23:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by helu010924 at 2013-01-16 14:23:01
是谷子里的某个基因。是要把全基因组扩增出来。...

扩增基因的话你直接P就是了。不过基因里面是有外显子和内含子的。用来做表达的话要用cDNA。
4楼2013-01-16 16:08:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

helu010924

铁虫 (小有名气)

你没明白我说啥。。。
宁愿笑着流泪,不愿哭着后悔
5楼2013-01-16 22:49:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wizardfan

至尊木虫 (著名写手)

优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你的基因多长?不是你想一对就一对的。
6楼2013-01-17 02:51:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ccharlien

木虫 (正式写手)

全长基因组两边都是从头取序列20个之后,参考Tm差别和GC含量决定两端的最终长度,不需要软件都可以
7楼2013-01-17 17:50:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liujie13251

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

将该基因的基因组序列全长重制到primer premier5.0软件,在上下游各选取合适长度的引物,20-24bp为好。设计引物的时候,rate一定要尽可能的高,80以上比较好。进行PCR扩增的时候建议用TAKARA的LAtaq酶,因为扩基因组序列一般比较长,一般的Taq酶很难扩出来。祝你好运。
8楼2013-03-01 21:04:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 helu010924 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 什么时候开奖? +11 CrisMessi 2026-08-18 12/600 2026-08-25 14:02 by monkeynana
[基金申请] 在坚冰还盖着北海的时候,我看到了怒放的梅花。 +3 ziyangfang 2026-08-25 3/150 2026-08-25 13:14 by huagongfeihu
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +9 图啦图啦 2026-08-24 10/500 2026-08-25 11:59 by 南海小哥
[基金申请] 人气不行了 +11 fansofjerry 2026-08-21 11/550 2026-08-25 11:04 by 孤独的英雄6
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +19 羊腰板 2026-08-21 22/1100 2026-08-25 10:38 by popular289
[基金申请] 今天基金会出结果吗?20260819 +17 kkkl_v 2026-08-19 18/900 2026-08-25 09:41 by windflowerwy
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +7 炎黄贵胄 2026-08-22 8/400 2026-08-25 08:48 by ZJTJZ
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +25 yaoyewhu2008 2026-08-20 27/1350 2026-08-25 08:01 by Equinoxhua
[基金申请] 明天应该可查了!? +5 chengyan1220 2026-08-23 5/250 2026-08-24 23:28 by 我4大白菜
[基金申请] filecode,4个jtjc了 +14 ziyangfang 2026-08-19 17/850 2026-08-24 18:37 by 哈哈蛤?
[基金申请] 今日不放榜?网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +17 医学老男孩 2026-08-20 21/1050 2026-08-24 14:21 by refreshing11
[基金申请] 让我中一个面上吧! +13 大萍1987 2026-08-20 16/800 2026-08-24 10:23 by 太傻了
[基金申请] 放榜前的不淡定 20+4 snowwithsea 2026-08-19 17/850 2026-08-24 10:20 by echo8914667
[基金申请] 今天放榜吗? +15 布布和一二 2026-08-19 16/800 2026-08-23 09:55 by 张春生
[基金申请] 时间戳今天,20号变了 +5 archvillain 2026-08-20 5/250 2026-08-22 06:12 by hui_daxiao
[基金申请] 看来今天不会放榜了? +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +9 yuleib84 2026-08-19 11/550 2026-08-21 10:06 by gltch
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
[基金申请] 明天放榜? +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
信息提示
请填处理意见