24小时热门版块排行榜    

查看: 1369  |  回复: 7
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

helu010924

铁虫 (小有名气)

[求助] 关于引物设计的问题

我想问一下,我已经知道了一个基因的全基因组序列,想要扩增出全长,怎么设计一对引物,就一对引物。怎么弄?用什么软件,希望步骤越详细越好。从3‘UTR 区和5’UTR区怎么弄。急,谢谢
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

宁愿笑着流泪,不愿哭着后悔
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liujie13251

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

将该基因的基因组序列全长重制到primer premier5.0软件,在上下游各选取合适长度的引物,20-24bp为好。设计引物的时候,rate一定要尽可能的高,80以上比较好。进行PCR扩增的时候建议用TAKARA的LAtaq酶,因为扩基因组序列一般比较长,一般的Taq酶很难扩出来。祝你好运。
8楼2013-03-01 21:04:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
不知道你克隆基因的目的。如果是做表达的话,直接从起始密码子到终止密码子就可以了,不用管5'UTR和3'UTR。如果是原核生物的话,一对引物以基因组DNA为模板直接P。如果是真核生物有内含子的,需要以cDNA为模板P。
2楼2013-01-16 14:17:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

helu010924

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-16 14:17:12
不知道你克隆基因的目的。如果是做表达的话,直接从起始密码子到终止密码子就可以了,不用管5'UTR和3'UTR。如果是原核生物的话,一对引物以基因组DNA为模板直接P。如果是真核生物有内含子的,需要以cDNA为模板P。

是谷子里的某个基因。是要把全基因组扩增出来。
宁愿笑着流泪,不愿哭着后悔
3楼2013-01-16 14:23:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by helu010924 at 2013-01-16 14:23:01
是谷子里的某个基因。是要把全基因组扩增出来。...

扩增基因的话你直接P就是了。不过基因里面是有外显子和内含子的。用来做表达的话要用cDNA。
4楼2013-01-16 16:08:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[博后之家] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 4/200 2026-08-29 05:45 by gy1nBQXYQJqL
[基金申请] 国自然评审意见 +11 wangmingqi 2026-08-28 15/750 2026-08-29 00:17 by fangyl2005
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 (金币+15) +13 晴天加油 2026-08-26 14/700 2026-08-28 18:36 by huagongfeihu
[基金申请] 系统查不到 +11 董八千 2026-08-26 11/550 2026-08-28 18:06 by Leogzhya
[教师之家] 导师吐槽:我怎么摊上了这么个极品研究生! +8 苏东坡二世 2026-08-23 8/400 2026-08-28 14:41 by lkforward
[基金申请] 基金不中,共勉 +11 eulota 2026-08-26 11/550 2026-08-28 14:22 by 火星超人xi
[基金申请] 基金系统什么内容也没有 30+4 winsaint 2026-08-27 9/450 2026-08-28 11:06 by maolC
[基金申请] 怎么查啊 +6 huang1991js 2026-08-26 6/300 2026-08-28 08:42 by winsaint
[基金申请] 哪位高人中了,把查询到的截图贴出来让我看看,让我长长见识 +5 yuleib84 2026-08-26 6/300 2026-08-28 00:02 by yudaoqian88
[基金申请] 面上合作单位盖章 +5 ssyjh 2026-08-27 5/250 2026-08-27 20:50 by gdfollow
[基金申请] 申请删除本帖 +6 lyz123lyz 2026-08-27 7/350 2026-08-27 17:31 by 宁静致远sy
[文学芳草园] 梦想 +3 myrtle 2026-08-26 3/150 2026-08-27 10:01 by angelyueyi
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +7 process2012 2026-08-23 10/500 2026-08-26 19:23 by hmhminy
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件,有关系吗? +25 木水思豆 2026-08-25 28/1400 2026-08-26 14:53 by draco1987
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +23 koalala 2026-08-24 26/1300 2026-08-26 14:29 by 宝贝虫子
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 系统进不去 +4 yanglien 2026-08-26 5/250 2026-08-26 11:10 by wenfengw83
[基金申请] 项目信息和经费信息在系统里都可以看到了 +6 wittyboy 2026-08-26 14/700 2026-08-26 10:55 by wittyboy
[基金申请] 国合可查了 +3 paperzjh 2026-08-26 3/150 2026-08-26 10:41 by LemmonTr
[基金申请] 如果此刻你正在为国基感到焦虑,不妨来听听这首《基金之外》 +8 scalable 2026-08-24 8/400 2026-08-25 12:52 by jnhyjjm
信息提示
请填处理意见