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H-xiangzhu金虫 (正式写手)
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[求助]
急！PCR产物测序找不到引物 已有1人参与
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| 我想做放线菌的16rDNA鉴定，先提取总DNA，PCR产物直接测序，引物采用细菌通用引物，大小在1500bp这样，但是测序结果发现找不到因为序列，请问我该怎么办呢？是什么问题呢？请高手帮忙。非常感谢！ |
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 测序相关问题 |
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【答案】应助回帖
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小丹木木: 金币+4, 欢迎应助 2013-01-05 17:31:20
小丹木木: 金币+4, 欢迎应助 2013-01-05 17:31:20
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你的PCR产物是1500bp的，测序图片的前100bp的峰都不可信，最后面的电泳峰（800bp以后）峰的信噪比比较低，大峰下面套小峰，都不能认为测到的序列。 如果你想在测序结果中找到引物序列（用上游引物测序的话，测序的结果最后的一段序列中只能找到与下游引物的反向互补序列一致的碱基；反之用下游引物测序，只能找到上游引物的反向互补序列），这是在你测得的序列可信的情况下才能得到的结果。你的PCR产物送去测序，测得的序列绝对不可能得到1500bp的结果的。 所以讲了这么一大堆，如果你想要从测序结果中得到引物序列，一个办法是分段测序，分三段，每500bp测一个，这样得到的序列3个拼接起来就能得到很好的结果了，也能找到你的引物序列了。 |
6楼2013-01-04 15:33:00
cicelyzh
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3楼2012-12-31 11:34:09
H-xiangzhu
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4楼2013-01-02 22:03:18
