应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 存档旧帖 » Q-pcr熔解曲线
181/2返回列表12下一页
查看: 2841  |  回复: 17
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

yanjiwuluo

新虫 (小有名气)

[求助] Q-pcr熔解曲线

请问各位高手，我初做Q-pcr，跑的线，为什么呢一开始就上升呢。就是CT值2.5左右。还有熔解曲线有两个相近的峰。是不是DNA模板浓度太大了。。。
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

QPCR 问题简答 QPCR实验困惑

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-12-20 09:52:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

孙启亮

金虫 (著名写手)
不应该是模板的问题，整理下上图吧
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2012-12-20 11:32:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yanjiwuluo

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 孙启亮 at 2012-12-20 11:32:35
不应该是模板的问题，整理下上图吧

看看我得扩增曲线，跟熔解曲线

1.png



2.png
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2012-12-20 17:47:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dongrh1981

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-12-24 18:55:40
和上面的虫子意见一样：引物特异性不好，建议提高退火温度，最彻底的办法就是重新设计引物。
如果实在是不能换引物，那就尝试一些小花招：改变PCR buffer 的严谨性；换用热启动酶；或者荧光PCR反应时先走10个退火温度为60度的循环，再走30个退火温度为55度的循环。
赞一下(1人) 回复此楼
呼吸的痛
9楼2012-12-21 11:54:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

yanjiwuluo

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 孙启亮 at 2012-12-20 11:32:35
不应该是模板的问题，整理下上图吧

好欢喜，在别的帖子上看过you。哈哈，好之后我把图传上
赞一下 回复此楼
3楼2012-12-20 12:33:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

昺昺

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
yanjiwuluo: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-12-21 12:12:39
应该是引物特异性的问题，我建议将退火温度提高
赞一下 回复此楼
太阳出来，星星要走。
5楼2012-12-20 20:45:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

stewart3261

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
yanjiwuluo: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-12-21 12:14:56
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-12-24 18:56:10
这样的扩增曲线是没有问题的，可以说还不错的。问题是熔解曲线不太好！有杂峰，表明有非特异性的扩增！解决办法，你可以再跑一次，确定引物能不能用。还有确保你RNA的质量！
赞一下 回复此楼
6楼2012-12-21 09:00:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

stewart3261

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

忘记一点，可以做一个退火温度梯度
赞一下 回复此楼
7楼2012-12-21 09:01:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

孙启亮

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
yanjiwuluo: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-12-21 12:16:51
引物特异性有问题，按理说你的引物退火温度在55度也不算低，建议你提高下退火温度，若杂峰仍没消除，重新设计引物吧
赞一下 回复此楼
8楼2012-12-21 09:24:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yanjiwuluo

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by stewart3261 at 2012-12-21 09:00:23
这样的扩增曲线是没有问题的，可以说还不错的。问题是熔解曲线不太好！有杂峰，表明有非特异性的扩增！解决办法，你可以再跑一次，确定引物能不能用。还有确保你RNA的质量！

我提的是DNA，我之前做过一个退火温度的梯度。然后54度是比较好的。怎么用55度Q-pcr时。熔解曲线就不好了
赞一下 回复此楼
10楼2012-12-21 12:14:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 yanjiwuluo 的主题更新
181/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 ZYXdhzDAy9ZX 2026-09-28 3/150 2026-09-29 06:42 by ZvyPK8n6Nfki
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 ZYXdhzDAy9ZX 2026-09-28 3/150 2026-09-29 06:34 by ZvyPK8n6Nfki
[找工作] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 ZYXdhzDAy9ZX 2026-09-28 3/150 2026-09-29 06:28 by ZvyPK8n6Nfki
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 ZYXdhzDAy9ZX 2026-09-28 3/150 2026-09-29 06:18 by ZvyPK8n6Nfki
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 tqUTOxClQUMF 2026-09-28 3/150 2026-09-28 23:46 by b8fCuTHqckEt
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 GDBe8tDZqE8z 2026-09-28 4/200 2026-09-28 23:19 by b8fCuTHqckEt
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 GDBe8tDZqE8z 2026-09-28 3/150 2026-09-28 23:12 by b8fCuTHqckEt
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 CfXuS1rDhLYN 2026-09-28 4/200 2026-09-28 22:55 by ez6fGg9abYaj
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 4/200 2026-09-28 22:55 by ez6fGg9abYaj
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 5/250 2026-09-28 22:45 by ez6fGg9abYaj
[有机交流] 同一个分子，一条来自文献，一条来自AI——不告诉你答案，你会选哪条？ +3 tianxiaoxian 2026-09-28 6/300 2026-09-28 22:44 by tianxiaoxian
[找工作] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 5/250 2026-09-28 22:32 by ez6fGg9abYaj
[公派出国] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 4/200 2026-09-28 22:28 by ez6fGg9abYaj
[博后之家] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 3/150 2026-09-28 22:21 by ez6fGg9abYaj
[考博] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 6/300 2026-09-28 22:15 by ez6fGg9abYaj
[论文投稿] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 CfXuS1rDhLYN 2026-09-28 3/150 2026-09-28 19:08 by 9lS3ad5oOymn
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 4/200 2026-09-28 18:51 by 9lS3ad5oOymn
[找工作] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 4/200 2026-09-28 17:30 by ZYXdhzDAy9ZX
[教师之家] 某top大学教授说“能够在市场中兑现的能力才是真能力”无比同意！ +7 zju2000 2026-09-26 8/400 2026-09-28 16:42 by beefly
[教师之家] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 GDBe8tDZqE8z 2026-09-28 3/150 2026-09-28 15:32 by ZYXdhzDAy9ZX
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭