9楼: Originally posted by dongrh1981 at 2012-12-21 11:54:40
和上面的虫子意见一样：引物特异性不好，建议提高退火温度，最彻底的办法就是重新设计引物。
如果实在是不能换引物，那就尝试一些小花招：改变PCR buffer 的严谨性；换用热启动酶；或者荧光PCR反应时先走10个退火温 ...

10楼: Originally posted by yanjiwuluo at 2012-12-21 12:14:47
我提的是DNA，我之前做过一个退火温度的梯度。然后54度是比较好的。怎么用55度Q-pcr时。熔解曲线就不好了...

12楼: Originally posted by stewart3261 at 2012-12-21 16:08:25
既然54度比较好，为什么要用55度？...

13楼: Originally posted by jl860822 at 2012-12-22 10:52:27
引物特异性不太好，你跑胶看一下就知道了，估计两个条带

15楼: Originally posted by yanjiwuluo at 2012-12-23 14:20:22
那该怎么办呢。难道要重新设计引物？我想着之前做的时候用同种引物特异性还挺好，不知道，这次用就又成两个峰了...是不是退火温度的事？...

14楼: Originally posted by yanjiwuluo at 2012-12-23 14:18:23
因为其他的引物在55.56度左右，所以我就取了个中间值。...

17楼: Originally posted by stewart3261 at 2012-12-24 09:11:38
你可以试一下别的引物在54度跑的怎么样！...