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yanjiwuluo

新虫 (小有名气)

[求助] Q-pcr熔解曲线

请问各位高手,我初做Q-pcr,跑的线,为什么呢一开始就上升呢。就是CT值2.5左右。还有熔解曲线有两个相近的峰。是不是DNA模板浓度太大了。。。
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dongrh1981

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-12-24 18:55:40
和上面的虫子意见一样:引物特异性不好,建议提高退火温度,最彻底的办法就是重新设计引物。
如果实在是不能换引物,那就尝试一些小花招:改变PCR buffer 的严谨性;换用热启动酶;或者荧光PCR反应时先走10个退火温度为60度的循环,再走30个退火温度为55度的循环。
呼吸的痛
9楼2012-12-21 11:54:40
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查看全部 18 个回答

孙启亮

金虫 (著名写手)

不应该是模板的问题,整理下上图吧
2楼2012-12-20 11:32:35
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yanjiwuluo

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 孙启亮 at 2012-12-20 11:32:35
不应该是模板的问题,整理下上图吧

好欢喜,在别的帖子上看过you。哈哈,好之后我把图传上
3楼2012-12-20 12:33:46
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yanjiwuluo

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 孙启亮 at 2012-12-20 11:32:35
不应该是模板的问题,整理下上图吧

看看我得扩增曲线,跟熔解曲线

1.png



2.png

4楼2012-12-20 17:47:32
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