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Cllair

金虫 (小有名气)

[求助] pcr测序后发现有重叠现象

提取出来基因,跑胶后条带很亮,切胶回收后去测序,发现有重叠现象,已经纯化分离测序了很多次了每次都是有重叠现象,实在不知道怎么办呢,请诸位指点一下吧。还有就是我想把该基因直接和t载体连接后去测质粒,这样是不是会好一点呢。江湖急救,高手帮忙啊。
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有今生没来世,且行且珍惜。
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joan198108

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
两种可能:模板本身不纯;引物特异性不高。最近我碰到过后面情况,换引物后解决了。
9楼2012-12-14 14:32:37
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追梦的人1987

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
最好还是连载体吧,可能是引物不太好!
2楼2012-12-11 22:17:33
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
PCR产物是有可能不是单一序列,跑胶一条带只能说明分子量很接近。连到载体上挑单克隆再去测序比较保险。
3楼2012-12-12 08:09:11
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Cllair

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 追梦的人1987 at 2012-12-11 22:17:33
最好还是连载体吧,可能是引物不太好!

我也觉得引物不太好,十次会有九次p不成功,但是相关资料少,引物就能设计到这个份上了。谢谢了哈。
有今生没来世,且行且珍惜。
4楼2012-12-12 16:00:06
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