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左岸的雅各宾

新虫 (初入文坛)

[求助] PCR产物有条带，原液没有条带？（我不久前申请的号，没多少金币。大家行行好吧。）

最左边是maker ，然后是4个原液，然后4个分别是原液相对应的PCR产物。
1、PCR产物的第三条是亮的。但其原液没有？
2、在第6条maker的位置有一排很黑的。什么原因或什么物质？

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1楼 2012-12-07 19:20:43
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

三撇五撇

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励应助和交流 2012-12-09 21:57:59
左岸的雅各宾: 金币+5, ★★★很有帮助 2012-12-12 11:51:51
1.那条黑带 如上述是应该是凝胶成像仪拍照的问题造成的。
2.原液看不到的情况不代表没有，只要有，你的PCR过程也OK，那么就会扩增出来东西。 但是你只有第三个PCR产物有亮带。是你的目的条带么？
第二个PCR产物下方是糊状的亮带，一般我会认为是模板和引物特异性不好 改变退火温度试试。
其余两个什么都没有，会不会是PCR过程中忘记加什么了？
在点样时胶空漏 也会是什么都没有的。
还有 可以试试多加几ul 模板试试 再不行就是模板得换了
遇到你的这种问题 我会多家模板和改变温度重新扩 如果不行那就是模板引物酶等的问题了
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9楼2012-12-09 11:43:25
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普通回帖

hxswdl

至尊木虫 (文坛精英)

Tortoise

文献杰出贡献

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
左岸的雅各宾: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-12-12 11:53:05
原液是模板？看不到不代表没有！那条黑带会不会是拍照时凝胶成像仪底板不干净引起的？挪动胶再照一张试试！如果是溴酚蓝应该每个泳道都有。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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Dripping Concentrated!!energetic and active！
2楼2012-12-07 20:04:18
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
原液如果是指模板本来就应该看不见的。PCR的模板浓度很低，如果跑胶能看到模板的话说明PCR模板加多了。照片发黑的应该是溴酚蓝指示剂。
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3楼2012-12-08 09:45:54
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左岸的雅各宾

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-12-08 09:45:54
原液如果是指模板本来就应该看不见的。PCR的模板浓度很低，如果跑胶能看到模板的话说明PCR模板加多了。照片发黑的应该是溴酚蓝指示剂。

原液是模板。我是先提出来，marker的左边四个就是的，每孔1ul的指示剂加5ul提取液。再用2ul的原液跑跑PCR，25体系的，再右边四个就是。正常情况下模板在第一条 maker上面一点，不知道这次为什么没有。
还有，指示剂按道理应该至少在最后一条marker那里啊。
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4楼2012-12-08 13:43:40
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左岸的雅各宾

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by hxswdl at 2012-12-07 20:04:18
原液是模板？看不到不代表没有！那条黑带会不会是拍照时凝胶成像仪底板不干净引起的？挪动胶再照一张试试！如果是溴酚蓝应该每个泳道都有。

原液是模板。我是先提出来，marker的左边四个就是的，每孔1ul的指示剂加5ul提取液。再用2ul的原液跑跑PCR，25体系的，再右边四个就是。正常情况下模板在第一条 maker上面一点，不知道这次为什么没有。
还有，指示剂按道理应该至少在最后一条marker那里啊。
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5楼2012-12-08 13:43:51
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xy656691

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
原液中模板的浓度很低，应该是看不到的，这很正常。marker中那个黑的可能像楼上说的是拍照的缘故吧
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6楼2012-12-08 14:24:36
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火舞精灵3

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
原液浓度低至看不到，PCR扩增后显示出条带，这是很正常的。至于你Marker看不到，这不应该啊?左边显示了，右边就没了？
           （你是左边点了5ul，右边也点了5ul Marker吧?）
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翻新核弹头,回收二手航母,大修核反应堆,航天飞机保养换三滤,高空作业擦洗卫星表面积尘,南极冰川修复,提供原子对撞机,提供捕捉反物质原子技术支持
7楼2012-12-08 16:27:30
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左岸的雅各宾

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 火舞精灵3 at 2012-12-08 16:27:30
原液浓度低至看不到，PCR扩增后显示出条带，这是很正常的。至于你Marker看不到，这不应该啊?左边显示了，右边就没了？
           （你是左边点了5ul，右边也点了5ul Marker吧?）

您误会了。只有左边有右边没点。
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8楼2012-12-08 18:00:48
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天空2011

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
大家说的都挺对的，就是模版浓度低显现不出来，至于黑的东西最可能是成像仪的问题，只要P出来的是你的目的条带就行，其他的不用太纠结！
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10楼2012-12-09 11:58:56
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