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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 存档旧帖 » 各位前辈我想请教下关于基因克隆的问题，急！
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glgno1

新虫 (初入文坛)

[求助] 各位前辈我想请教下关于基因克隆的问题，急！

各位前辈我想请教下关于基因克隆的问题。本人通过RACE法扩出3800bp的一段序列，当然是通过3'和5’RACE分别扩增的，但是当我把两端扩增的片段连接的全长放到开放阅读框里检验时发现有两个长的编码区，我想知道是拼的时候有误差还是存在有两个开放阅读框的基因，请各位指点 非常感谢
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glgsno1
1楼 2012-12-06 21:41:30
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bloodwar

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
他可能还是要用RNA做模版，做一部分RT-PCR进行检测吧，不然只用cDNA的话，可能浓度不够，建议用下affinity的一步法试剂盒，扩低浓度的RNA效果很好
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3楼2012-12-07 05:46:16
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-12-07 13:30:11
glgno1: 金币+1 2012-12-11 12:57:24
你可能还需要做进一步的验证，在你克隆的序列的两头设计引物，然后你cDNA为模板扩增序列，克隆到T载体后送去测序，确保你RACE到的序列是真实，准确和完整。
在你这一步，序列验证无误后，接下来再做ORF分析，否则第一步序列没验证好，后面的实验就缺乏坚实的基础。
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2012-12-06 22:41:01
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