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yx_sun70

金虫 (正式写手)

[求助] 有用同源重组法进行基因克隆和载体构建的吗? 已有1人参与

有用同源重组法进行基因克隆和载体构建的吗?这个技术比传统的ta克隆好用吗,做起来困难否?求教!
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yashangzhuo

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 阿香1124 at 2014-10-09 10:45:15
我用同源重组做小片段的连接挺好的,但是现在有一个要连一个片段,连接之后是11kb,转化板子上就是不长,求高人指导

请问你们怎么鉴定有没有重组上呢 我重组后与重组前就相差36 bp,PCR鉴定琼脂糖凝胶区分不了,老师建议重新设计引物,觉得麻烦,有更好的建议吗?
9楼2015-06-02 16:48:56
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查看全部 9 个回答

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
yx_sun70: 金币+1, 有帮助, 多谢! 2012-11-20 14:10:14
用同源重组方法构建载体是可以的,但一般这种用来改造病毒基因组,比如腺病毒基因组比较大50多kb
需要用到特殊的菌株,比如BJ5183这个菌株
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2012-11-18 18:55:23
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1514132

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
yx_sun70: 金币+1, 有帮助 2012-11-23 14:30:49
yx_sun70(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-05-14 02:01:22
在昆虫杆状病毒表达系统上,也用到同源重组。感觉还好吧,不难

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
3楼2012-11-18 20:21:47
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irenescbg

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
yx_sun70: 金币+5, ★★★★★最佳答案 2012-11-23 14:30:31
kx444555: 金币+1, 还有INVITROGEN 的GATEWAY技术 2012-11-26 22:08:19
gyesang: 回帖置顶 2013-05-14 02:01:59
你是说的in fusion的方法做克隆吗?这里有介绍:
http://www.clontech.com/US/Produ ... ning_Kits-HD-Liquid

我们用的是这个。你可以直接PCR一个片段(引物设计有要求),把载体切成线性的,然后用同源重组的方法克隆,效果很好,尤其是找不到合适的酶切位点的时候更合适。现在我们用这个方法克隆了不少片段了。相比传统的TA克隆,这种方法可以直接克隆到目的载体中,不需要中间步骤。但是片段浓度要高。就是贵了点。不过我们每次就用2ul体系就可以了。
请赐予我正能量吧!加油!
4楼2012-11-19 16:01:02
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