应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 有用同源重组法进行基因克隆和载体构建的吗？
91/1返回列表
查看: 5692  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

yx_sun70

金虫 (正式写手)

[求助] 有用同源重组法进行基因克隆和载体构建的吗？ 已有1人参与

有用同源重组法进行基因克隆和载体构建的吗？这个技术比传统的ta克隆好用吗，做起来困难否？求教！
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

分子生化实验经验积累

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-11-18 18:40:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
yx_sun70: 金币+1, ★有帮助, 多谢！ 2012-11-20 14:10:14
用同源重组方法构建载体是可以的，但一般这种用来改造病毒基因组，比如腺病毒基因组比较大50多kb
需要用到特殊的菌株，比如BJ5183这个菌株
赞一下 回复此楼
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2012-11-18 18:55:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

1514132

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
yx_sun70: 金币+1, ★有帮助 2012-11-23 14:30:49
yx_sun70(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-14 02:01:22
在昆虫杆状病毒表达系统上，也用到同源重组。感觉还好吧，不难

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
3楼2012-11-18 20:21:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

irenescbg

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
yx_sun70: 金币+5, ★★★★★最佳答案 2012-11-23 14:30:31
kx444555: 金币+1, 还有INVITROGEN 的GATEWAY技术 2012-11-26 22:08:19
gyesang: 回帖置顶 2013-05-14 02:01:59
你是说的in fusion的方法做克隆吗？这里有介绍：
http://www.clontech.com/US/Produ ... ning_Kits-HD-Liquid

我们用的是这个。你可以直接PCR一个片段（引物设计有要求），把载体切成线性的，然后用同源重组的方法克隆，效果很好，尤其是找不到合适的酶切位点的时候更合适。现在我们用这个方法克隆了不少片段了。相比传统的TA克隆，这种方法可以直接克隆到目的载体中，不需要中间步骤。但是片段浓度要高。就是贵了点。不过我们每次就用2ul体系就可以了。
赞一下(1人) 回复此楼
请赐予我正能量吧！加油！
4楼2012-11-19 16:01:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

biobiobio

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
yx_sun70: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-11-27 18:07:27
yx_sun70(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-14 02:01:40
相对TA克隆这种方法的优点是：
片段一步克隆到表达载体
不受载体和酶切位点限制
一次性可完成多片段无缝克隆
能解决传统方法难以解决的问题，成功率及阳性率真远高于传统克隆
缺点是一个是贵了点，in-fusion，国内的也有，便宜些clonexpress
另一个缺点是习惯问题，没用过这种方法的人第一次做不太习惯的，用久了挺好用的，很快
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2012-11-26 20:45:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yx_sun70

金虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by biobiobio at 2012-11-26 20:45:17
相对TA克隆这种方法的优点是：
片段一步克隆到表达载体
不受载体和酶切位点限制
一次性可完成多片段无缝克隆
能解决传统方法难以解决的问题，成功率及阳性率真远高于传统克隆
缺点是一个是贵了点，in-fusion， ...

请问您用过国内的吗，那家公司的好用些？
赞一下 回复此楼
6楼2013-04-29 11:20:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yx_sun70

金虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by irenescbg at 2012-11-19 16:01:02
你是说的in fusion的方法做克隆吗？这里有介绍：
http://www.clontech.com/US/Products/Cloning_and_Competent_Cells/Cloning_Kits/Cloning_Kits-HD-Liquid

我们用的是这个。你可以直接PCR一个片段（引物设计有 ...

我们做的总出很多的假阳性克隆，已经排除不是酶切不完全的问题，不知您是否给些建议？怎么也想不出这些假阳性是怎么来的。
赞一下 回复此楼
7楼2013-05-13 17:29:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

阿香1124

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我用同源重组做小片段的连接挺好的，但是现在有一个要连一个片段，连接之后是11kb，转化板子上就是不长，求高人指导
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2014-10-09 10:45:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yashangzhuo

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 阿香1124 at 2014-10-09 10:45:15
我用同源重组做小片段的连接挺好的，但是现在有一个要连一个片段，连接之后是11kb，转化板子上就是不长，求高人指导

请问你们怎么鉴定有没有重组上呢 我重组后与重组前就相差36 bp，PCR鉴定琼脂糖凝胶区分不了，老师建议重新设计引物，觉得麻烦，有更好的建议吗？
赞一下 回复此楼
9楼2015-06-02 16:48:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 yx_sun70 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +12 koalala 2026-08-24 14/700 2026-08-24 12:41 by S09300097
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +17 羊腰板 2026-08-21 18/900 2026-08-24 12:03 by iaeyuan
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +12 kulium 2026-08-21 15/750 2026-08-24 12:02 by iaeyuan
[基金申请] 朋友圈看到的 +7 wangzilk 2026-08-18 9/450 2026-08-24 10:50 by cmrandy
[基金申请] 让我中一个面上吧！ +13 大萍1987 2026-08-20 16/800 2026-08-24 10:23 by 太傻了
[基金申请] 放榜前的不淡定 20+4 snowwithsea 2026-08-19 17/850 2026-08-24 10:20 by echo8914667
[基金申请] 明天应该可查了！？ +4 chengyan1220 2026-08-23 4/200 2026-08-24 08:47 by gloomy6159
[基金申请] 什么时候开奖？ +10 CrisMessi 2026-08-18 11/550 2026-08-24 06:50 by 开心的小狮子
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +4 process2012 2026-08-23 5/250 2026-08-23 19:58 by jurkat.1640
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办？ +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
[基金申请] 今天放榜吗？ +15 布布和一二 2026-08-19 16/800 2026-08-23 09:55 by 张春生
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +7 且听虎啸 2026-08-17 8/400 2026-08-22 21:55 by 医学老男孩
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +24 yaoyewhu2008 2026-08-20 26/1300 2026-08-22 17:43 by kammury
[基金申请] filecode，4个jtjc了 +13 ziyangfang 2026-08-19 16/800 2026-08-22 17:08 by WH3796
[基金申请] 今天基金会出结果吗？20260819 +16 kkkl_v 2026-08-19 17/850 2026-08-22 16:12 by 阿布Abu
[基金申请] 时间戳今天，20号变了 +5 archvillain 2026-08-20 5/250 2026-08-22 06:12 by hui_daxiao
[基金申请] 看来今天不会放榜了？ +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
[基金申请] 我面上完蛋了 +7 且听虎啸 2026-08-20 8/400 2026-08-21 12:31 by 酷酷墨镜
[基金申请] 重要消息，中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭