应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 有用同源重组法进行基因克隆和载体构建的吗？
51/1返回列表
查看: 5707  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

yx_sun70

金虫 (正式写手)

[求助] 有用同源重组法进行基因克隆和载体构建的吗？ 已有1人参与

有用同源重组法进行基因克隆和载体构建的吗？这个技术比传统的ta克隆好用吗，做起来困难否？求教！
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

分子生化实验经验积累

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-11-18 18:40:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yx_sun70

金虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by irenescbg at 2012-11-19 16:01:02
你是说的in fusion的方法做克隆吗？这里有介绍：
http://www.clontech.com/US/Products/Cloning_and_Competent_Cells/Cloning_Kits/Cloning_Kits-HD-Liquid

我们用的是这个。你可以直接PCR一个片段（引物设计有 ...

我们做的总出很多的假阳性克隆，已经排除不是酶切不完全的问题，不知您是否给些建议？怎么也想不出这些假阳性是怎么来的。
赞一下 回复此楼
7楼2013-05-13 17:29:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
yx_sun70: 金币+1, ★有帮助, 多谢！ 2012-11-20 14:10:14
用同源重组方法构建载体是可以的，但一般这种用来改造病毒基因组，比如腺病毒基因组比较大50多kb
需要用到特殊的菌株，比如BJ5183这个菌株
赞一下 回复此楼
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2012-11-18 18:55:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

1514132

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
yx_sun70: 金币+1, ★有帮助 2012-11-23 14:30:49
yx_sun70(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-14 02:01:22
在昆虫杆状病毒表达系统上，也用到同源重组。感觉还好吧，不难

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
3楼2012-11-18 20:21:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

irenescbg

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
yx_sun70: 金币+5, ★★★★★最佳答案 2012-11-23 14:30:31
kx444555: 金币+1, 还有INVITROGEN 的GATEWAY技术 2012-11-26 22:08:19
gyesang: 回帖置顶 2013-05-14 02:01:59
你是说的in fusion的方法做克隆吗？这里有介绍：
http://www.clontech.com/US/Produ ... ning_Kits-HD-Liquid

我们用的是这个。你可以直接PCR一个片段（引物设计有要求），把载体切成线性的，然后用同源重组的方法克隆，效果很好，尤其是找不到合适的酶切位点的时候更合适。现在我们用这个方法克隆了不少片段了。相比传统的TA克隆，这种方法可以直接克隆到目的载体中，不需要中间步骤。但是片段浓度要高。就是贵了点。不过我们每次就用2ul体系就可以了。
赞一下(1人) 回复此楼
请赐予我正能量吧！加油！
4楼2012-11-19 16:01:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的？ +17 爱看书的可乐 2026-08-26 19/950 2026-08-30 22:24 by xiangy672
[基金申请] 为什么到现在没收到通知？ +5 tannykie 2026-08-29 5/250 2026-08-30 21:05 by purplejack
[基金申请] 有没有仍没收到信息的 +7 德尚中行 2026-08-27 8/400 2026-08-30 20:52 by purplejack
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 4FFAWE8HcgUD 2026-08-29 3/150 2026-08-30 20:10 by hZiFeudZyoGR
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 jCd0dEvKHShX 2026-08-29 4/200 2026-08-30 19:34 by hZiFeudZyoGR
[考博] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 jCd0dEvKHShX 2026-08-29 6/300 2026-08-30 19:13 by hZiFeudZyoGR
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 jCd0dEvKHShX 2026-08-29 4/200 2026-08-30 19:13 by hZiFeudZyoGR
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 G6APbkg8SA6w 2026-08-29 5/250 2026-08-30 18:40 by hZiFeudZyoGR
[考博] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 5/250 2026-08-30 17:56 by hZiFeudZyoGR
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +6 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 9/450 2026-08-30 17:56 by hZiFeudZyoGR
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +7 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 11/550 2026-08-30 17:34 by hZiFeudZyoGR
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 jCd0dEvKHShX 2026-08-29 5/250 2026-08-30 14:03 by GkCVyODlx4mR
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见（F口面上） +6 gdd2018 2026-08-28 11/550 2026-08-30 08:58 by 超级无敌华子
[教师之家] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 8/400 2026-08-30 05:48 by ZPa0EcMwuECS
[基金申请] 基金不中，共勉 +11 eulota 2026-08-26 11/550 2026-08-28 14:22 by 火星超人xi
[基金申请] 看板上这么多中的，有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
[基金申请] 我不理解！ +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
[基金申请] 国际合作可查了，中了面上 (EPI+1)(金币+50) +18 Ldrop2023 2026-08-26 18/900 2026-08-26 11:15 by cmrandy
[基金申请] 项目信息和经费信息在系统里都可以看到了 +6 wittyboy 2026-08-26 14/700 2026-08-26 10:55 by wittyboy
[基金申请] 在坚冰还盖着北海的时候，我看到了怒放的梅花。 (金币+10) +6 ziyangfang 2026-08-25 9/450 2026-08-25 20:26 by huagongfeihu
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭