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山水506

铜虫 (初入文坛)

[求助] western blot 出不来结果!!!

各位达人,我刚开始做western,不过也做过好多次了,每一次要么是什么都没有,要么是有若隐若现的条带,结果总是不好。请问是怎么回事啊?
PS:用考马斯亮蓝染色,发现胶上基本没有蛋白了,可在曝光后用丽春红染膜后没有发现蛋白条带,但在网上查,说有的没染出来也能做出来啊!
谢谢各位了~~
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遥控器68

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
yqbter: 金币+1, 鼓励发帖! 2012-11-03 17:19:38
山水506: 金币+2, ★有帮助 2012-11-07 21:22:08
在一块胶上点两遍样,一半考染一半转膜。
转的时候注意时间,可以换换显色方法。
抗体质量怎么样,工作用比例是多少刚做时候试个比较好的浓度出来。
4楼2012-11-03 15:03:21
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wenzonglu

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
考马斯亮蓝染不出条带,说明凝胶上没有蛋白,更不说转膜啦。先确定目的蛋白在凝胶上,可加标准蛋白来确定,加大上样量。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

2楼2012-11-03 14:23:16
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wsgcc

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
yqbter: 金币+1, 鼓励发高质量帖 2012-11-03 17:19:29
山水506: 金币+10, ★★★很有帮助, 谢谢了 2012-11-07 21:21:42
Western是要比考染敏感,肉眼看不到的条带也wetstern可出条带。我觉得楼主的问题可以进行以下尝试:
1.可以同时跑两块一样的胶,一块直接考染,一块转膜后考染,进行一下对比;
2.买个预染蛋白Marker一起跑、转,这样转没转过去,一目了然,国产的预染Marker也不贵;
3.胶上蛋白没了,丽春红膜上没染出来,是不是转过了,直接到膜底下的滤纸上去了,用PVDF膜要好些。
以上仅供参考,祝实验顺利,呵呵。
3楼2012-11-03 14:48:02
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xiaoqi5992

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
除了上面几位说的你也可以考虑考虑上样量的问题,加大上样量试试。
5楼2012-11-05 09:27:29
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