24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 1109  |  回复: 6
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

天yi

铜虫 (小有名气)

[求助] 反转录PCR扩增后条带问题

最近在做反转录PCR,事先通过Primer5.0确定了引物位置,扩增出的目的条带应该有1500bp,不知道为什么我做出来的只有500bp左右,求高人指点啊?我是新手,这方面不怎么懂.
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

guoxingliu

木虫 (小有名气)

到ncbi比对一下,看是否有同源的刚好是500bp。
6楼2012-10-23 17:31:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答

西瓜

荣誉版主 (知名作家)

会不会是没考虑内含子?如果是根据基因组DNA设计的引物,而碰巧这1500bp里面有内含子,就可能出现这种情况。因为从RNA反转录来的cDNA是不包括内含子的。
2楼2012-10-18 20:54:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天yi

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 西瓜 at 2012-10-18 20:54:11
会不会是没考虑内含子?如果是根据基因组DNA设计的引物,而碰巧这1500bp里面有内含子,就可能出现这种情况。因为从RNA反转录来的cDNA是不包括内含子的。

PCR扩增目的条带有2300bp,内含子大约只有800bp,就是去掉内含子之后应该是1500bp
3楼2012-10-19 14:23:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

guoxingliu

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
天yi: 金币+1 2012-10-22 21:28:57
设计的引物特异性好吗,否则可能反转录的是整个cDNA的部分序列,建议在检查检查!
4楼2012-10-21 09:21:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0856材料化工调剂 总分330 +11 zhubinhao 2026-03-27 11/550 2026-03-28 20:22 by 418490947
[考研] 0703本科郑州大学求调剂 +3 nhj_ 2026-03-25 3/150 2026-03-28 13:24 by Iveryant
[考研] 299求调剂 +7 嗯嗯嗯嗯2 2026-03-27 7/350 2026-03-28 13:09 by 唐沐儿
[考研] 070300求调剂306分 +4 26要上岸 2026-03-27 4/200 2026-03-28 13:06 by 唐沐儿
[考研] 材料求调剂 一志愿哈工大总分298分,前三科223分 +5 dongfang59 2026-03-27 5/250 2026-03-28 04:53 by wxiongid
[考研] 315分求调剂 +7 26考研上岸版26 2026-03-26 7/350 2026-03-28 04:05 by fmesaito
[考研] 291求调剂 +7 孅華 2026-03-22 7/350 2026-03-28 04:02 by fmesaito
[考研] 266求调剂 +11 阳阳哇塞 2026-03-27 12/600 2026-03-27 17:56 by yu221
[考研] 272求调剂 +7 脚滑的守法公民 2026-03-27 7/350 2026-03-27 17:23 by laoshidan
[考研] 307求调剂 +8 超级伊昂大王 2026-03-24 9/450 2026-03-27 15:34 by 超级伊昂大王
[考研] 336材料求调剂 +7 陈滢莹 2026-03-26 9/450 2026-03-27 00:20 by wxiongid
[考研] 材料调剂 5+4 想要一壶桃花水 2026-03-25 10/500 2026-03-26 19:56 by 不吃魚的貓
[考研] 生物学 296 求调剂 +4 朵朵- 2026-03-26 6/300 2026-03-26 19:01 by 不吃魚的貓
[考研] 085601求调剂总分293英一数二 +4 钢铁大炮 2026-03-24 4/200 2026-03-26 16:28 by dick_runner
[考研] 086000生物与医药292求调剂 +6 小小陈小小 2026-03-22 9/450 2026-03-26 15:58 by dick_runner
[考研] 302求调剂 +4 锦衣卫藤椒 2026-03-25 4/200 2026-03-25 16:29 by 功夫疯狂
[考研] 求调剂 +3 李李不服输 2026-03-25 3/150 2026-03-25 13:03 by cmz0325
[考研] 300分,材料,求调剂,英一数二 +5 超赞的 2026-03-24 5/250 2026-03-24 21:07 by 星空星月
[考研] 080500求调剂 +3 zzzzfan 2026-03-24 3/150 2026-03-24 16:38 by barlinike
[考研] 308求调剂 +3 墨墨漠 2026-03-21 3/150 2026-03-22 16:54 by i_cooler
信息提示
请填处理意见