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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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天yi

铜虫 (小有名气)

[求助] 反转录PCR扩增后条带问题

最近在做反转录PCR,事先通过Primer5.0确定了引物位置,扩增出的目的条带应该有1500bp,不知道为什么我做出来的只有500bp左右,求高人指点啊?我是新手,这方面不怎么懂.
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guoxingliu

木虫 (小有名气)

到ncbi比对一下,看是否有同源的刚好是500bp。
6楼2012-10-23 17:31:07
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)

会不会是没考虑内含子?如果是根据基因组DNA设计的引物,而碰巧这1500bp里面有内含子,就可能出现这种情况。因为从RNA反转录来的cDNA是不包括内含子的。
2楼2012-10-18 20:54:11
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天yi

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 西瓜 at 2012-10-18 20:54:11
会不会是没考虑内含子?如果是根据基因组DNA设计的引物,而碰巧这1500bp里面有内含子,就可能出现这种情况。因为从RNA反转录来的cDNA是不包括内含子的。

PCR扩增目的条带有2300bp,内含子大约只有800bp,就是去掉内含子之后应该是1500bp
3楼2012-10-19 14:23:59
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guoxingliu

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
天yi: 金币+1 2012-10-22 21:28:57
设计的引物特异性好吗,否则可能反转录的是整个cDNA的部分序列,建议在检查检查!
4楼2012-10-21 09:21:31
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