24小时热门版块排行榜    

查看: 1306  |  回复: 6
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

天yi

铜虫 (小有名气)

[求助] 反转录PCR扩增后条带问题

最近在做反转录PCR,事先通过Primer5.0确定了引物位置,扩增出的目的条带应该有1500bp,不知道为什么我做出来的只有500bp左右,求高人指点啊?我是新手,这方面不怎么懂.
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

guoxingliu

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
天yi: 金币+1 2012-10-22 21:28:57
设计的引物特异性好吗,否则可能反转录的是整个cDNA的部分序列,建议在检查检查!
4楼2012-10-21 09:21:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答

西瓜

荣誉版主 (知名作家)

会不会是没考虑内含子?如果是根据基因组DNA设计的引物,而碰巧这1500bp里面有内含子,就可能出现这种情况。因为从RNA反转录来的cDNA是不包括内含子的。
2楼2012-10-18 20:54:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天yi

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 西瓜 at 2012-10-18 20:54:11
会不会是没考虑内含子?如果是根据基因组DNA设计的引物,而碰巧这1500bp里面有内含子,就可能出现这种情况。因为从RNA反转录来的cDNA是不包括内含子的。

PCR扩增目的条带有2300bp,内含子大约只有800bp,就是去掉内含子之后应该是1500bp
3楼2012-10-19 14:23:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天yi

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by guoxingliu at 2012-10-21 09:21:31
设计的引物特异性好吗,否则可能反转录的是整个cDNA的部分序列,建议在检查检查!

那是不是去测序一下?
5楼2012-10-22 21:30:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 面上合作单位盖章 +6 ssyjh 2026-08-27 9/450 2026-09-01 20:01 by huagongfeihu
[基金申请] 面上函评意见出来了,像什么等级? 20+4 Tsingking1 2026-08-27 17/850 2026-09-01 19:51 by 超级无敌华子
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +5 bjdxyxy 2026-08-26 5/250 2026-09-01 17:54 by 小伟大博士
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见(F口面上) +7 gdd2018 2026-08-28 12/600 2026-09-01 08:32 by 尼古拉斯小虫
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +6 叶九微 2026-08-26 6/300 2026-08-31 23:54 by yudaoqian88
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的? +17 爱看书的可乐 2026-08-26 19/950 2026-08-31 21:30 by xiangy672
[基金申请] 基金未中,这种答复是模板吗? +6 zhaosm1982 2026-08-27 7/350 2026-08-31 21:18 by qdxxmc
[基金申请] 面上意见出来了 +12 黄鸟于飞Chao 2026-08-29 23/1150 2026-08-31 18:57 by 黄鸟于飞Chao
[基金申请] 中青基了要发朋友圈吗? +7 349506619 2026-08-28 7/350 2026-08-31 13:39 by 冼亮淀粉酶
[基金申请] 基金不中,共勉 +12 eulota 2026-08-26 12/600 2026-08-31 08:42 by ZJTJZ
[基金申请] 为什么到现在没收到通知? +5 tannykie 2026-08-29 5/250 2026-08-30 21:05 by purplejack
[基金申请] 有没有仍没收到信息的 +7 德尚中行 2026-08-27 8/400 2026-08-30 20:52 by purplejack
[基金申请] 我就是申请一个面上项目而已,这评审意见是按照杰青的条件评的吧? +6 gouxfjh 2026-08-28 11/550 2026-08-30 07:57 by gouxfjh
[基金申请] 怎么查啊 +6 huang1991js 2026-08-26 6/300 2026-08-28 08:42 by winsaint
[基金申请] 看板上这么多中的,有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
[基金申请] 我不理解! +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 系统进不去 +4 yanglien 2026-08-26 5/250 2026-08-26 11:10 by wenfengw83
[基金申请] 国合可查了 +3 paperzjh 2026-08-26 3/150 2026-08-26 10:41 by LemmonTr
信息提示
请填处理意见