24小时热门版块排行榜    

查看: 1303  |  回复: 6

天yi

铜虫 (小有名气)

[求助] 反转录PCR扩增后条带问题

最近在做反转录PCR,事先通过Primer5.0确定了引物位置,扩增出的目的条带应该有1500bp,不知道为什么我做出来的只有500bp左右,求高人指点啊?我是新手,这方面不怎么懂.
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

西瓜

荣誉版主 (知名作家)

会不会是没考虑内含子?如果是根据基因组DNA设计的引物,而碰巧这1500bp里面有内含子,就可能出现这种情况。因为从RNA反转录来的cDNA是不包括内含子的。
2楼2012-10-18 20:54:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天yi

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 西瓜 at 2012-10-18 20:54:11
会不会是没考虑内含子?如果是根据基因组DNA设计的引物,而碰巧这1500bp里面有内含子,就可能出现这种情况。因为从RNA反转录来的cDNA是不包括内含子的。

PCR扩增目的条带有2300bp,内含子大约只有800bp,就是去掉内含子之后应该是1500bp
3楼2012-10-19 14:23:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

guoxingliu

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
天yi: 金币+1 2012-10-22 21:28:57
设计的引物特异性好吗,否则可能反转录的是整个cDNA的部分序列,建议在检查检查!
4楼2012-10-21 09:21:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天yi

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by guoxingliu at 2012-10-21 09:21:31
设计的引物特异性好吗,否则可能反转录的是整个cDNA的部分序列,建议在检查检查!

那是不是去测序一下?
5楼2012-10-22 21:30:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

guoxingliu

木虫 (小有名气)

到ncbi比对一下,看是否有同源的刚好是500bp。
6楼2012-10-23 17:31:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gdj363702043

金虫 (正式写手)

我觉得大部分发生这种情况一般都是引物问题就是发生非特异性扩增   前提是你测试过你RNA提取的纯度达标情况下
加油努力
7楼2012-11-21 09:43:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 天yi 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[文学芳草园] 梦想 +5 myrtle 2026-08-26 7/350 2026-09-01 15:18 by myrtle
[基金申请] 面上函评意见出来了,像什么等级? 20+4 Tsingking1 2026-08-27 15/750 2026-09-01 12:23 by icm639
[基金申请] 为什么资助数各大高校都创新高,自己申请怎么就这么难 +13 Kittylucky 2026-08-27 14/700 2026-09-01 11:06 by feng6531
[论文投稿] 小白求助 投论文要求的highlights应该如何写 5+3 l1963982152 2026-08-29 4/200 2026-09-01 09:04 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +6 叶九微 2026-08-26 6/300 2026-08-31 23:54 by yudaoqian88
[基金申请] 基金未中,这种答复是模板吗? +6 zhaosm1982 2026-08-27 7/350 2026-08-31 21:18 by qdxxmc
[基金申请] 面上意见出来了 +12 黄鸟于飞Chao 2026-08-29 23/1150 2026-08-31 18:57 by 黄鸟于飞Chao
[基金申请] 能否申诉? +7 echo8914667 2026-08-30 8/400 2026-08-31 17:00 by yihongxu
[基金申请] 为什么到现在没收到通知? +5 tannykie 2026-08-29 5/250 2026-08-30 21:05 by purplejack
[基金申请] 有没有仍没收到信息的 +7 德尚中行 2026-08-27 8/400 2026-08-30 20:52 by purplejack
[基金申请] 国自然评审意见 +13 wangmingqi 2026-08-28 19/950 2026-08-29 10:22 by Poppy1104
[基金申请] 系统查不到 +11 董八千 2026-08-26 11/550 2026-08-28 18:06 by Leogzhya
[基金申请] 怎么查啊 +6 huang1991js 2026-08-26 6/300 2026-08-28 08:42 by winsaint
[基金申请] 看板上这么多中的,有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
[基金申请] 为什么 国际(地区)合作与交流项目 没有放榜? 10+3 majunge000 2026-08-26 11/550 2026-08-27 08:42 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件,有关系吗? +25 木水思豆 2026-08-25 28/1400 2026-08-26 14:53 by draco1987
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +4 bjdxyxy 2026-08-26 4/200 2026-08-26 13:12 by qingmu1201
[基金申请] 国际合作可查了,中了面上 (EPI+1)(金币+50) +18 Ldrop2023 2026-08-26 18/900 2026-08-26 11:15 by cmrandy
[基金申请] 国合可查了 +3 paperzjh 2026-08-26 3/150 2026-08-26 10:41 by LemmonTr
信息提示
请填处理意见