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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 电转酵母，请求帮助！
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weizhe34

至尊木虫 (职业作家)

[求助] 电转酵母，请求帮助！

请问各位大家，我电转酵母没长出来，具体是，载体PPICZBa，线性化后片段纯化的DNA20ug，于自己做的X33，GS115感受态，点击杯0.2cm，电压，1.8kv，电容25uF，电阻200,电击5msec左右，长了两天没有，长三天以上感觉是杂菌，请高手分析，为什么长不出来，其他操作我是按照invitrogen说明来的，O(∩_∩)O谢谢了！
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1楼 2012-08-06 07:19:01
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healy13

禁虫 (小有名气)
感谢参与，应助指数 +1
本帖内容被屏蔽
2楼2012-08-06 10:32:47
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weizhe34

至尊木虫 (职业作家)
引用回帖:
2楼: Originally posted by healy13 at 2012-08-06 10:32:47
会不会是你感受态没有做好？或者你的DNA线性化不完全~

你在么？ 感受态按照说明书做的。 线性化4h 是NEB的酶，酶切后我电泳很正常的
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3楼2012-08-06 14:06:30
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小丹木木

荣誉版主 (著名写手)
其实我也有一次电转没长出来
说说我的经验，你是不是电转的时候电转杯没有卡到位，电转完成后，你可以检查一下，电转杯上是否有划痕，这个很重要的。后来我就重点注意这个，然后就电转很成功，长的很HAPPY.
当然线性化 DNA的质量了，感受态的质量都很重要的
我是觉得，如果你电转后一个转化子都没有，那么就要考虑你是不是根本么有电转。纯属个人看法，希望实验顺利
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4楼2012-08-06 15:21:11
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weizhe34

至尊木虫 (职业作家)
引用回帖:
3楼: Originally posted by weizhe34 at 2012-08-06 14:06:30
你在么？ 感受态按照说明书做的。 线性化4h 是NEB的酶，酶切后我电泳很正常的...

你好，电转被有划痕，感受态不知道好不好，有什么好的建议么，谢谢了！
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5楼2012-08-06 17:15:16
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weizhe34

至尊木虫 (职业作家)
引用回帖:
3楼: Originally posted by weizhe34 at 2012-08-06 14:06:30
你在么？ 感受态按照说明书做的。 线性化4h 是NEB的酶，酶切后我电泳很正常的...

你好，电转被有划痕，感受态不知道好不好，有什么好的建议么，谢谢了！
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6楼2012-08-06 17:20:51
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weizhe34

至尊木虫 (职业作家)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 小丹木木 at 2012-08-06 15:21:11
其实我也有一次电转没长出来
说说我的经验，你是不是电转的时候电转杯没有卡到位，电转完成后，你可以检查一下，电转杯上是否有划痕，这个很重要的。后来我就重点注意这个，然后就电转很成功，长的很HAPPY.
当然线 ...

你好，电转被有划痕，感受态不知道好不好，有什么好的建议么，谢谢了！
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7楼2012-08-06 17:20:57
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小丹木木

荣誉版主 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
7楼: Originally posted by weizhe34 at 2012-08-06 17:20:57
你好，电转被有划痕，感受态不知道好不好，有什么好的建议么，谢谢了！...

那你线性化后是怎么处理的，胶回收还是酚氯仿抽提的？
这个是很重要的，DNA中如果有乙醇什么的话，电转就不大容易成功。
感受态的话现做现用，就算做是再不好，也不可能一个都不长的。
当然了，感受态一定要在低温下做啊，这个是很重要的
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weizhe34
8楼2012-08-07 08:10:10
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weizhe34

至尊木虫 (职业作家)
送鲜花一朵
引用回帖:
8楼: Originally posted by 小丹木木 at 2012-08-07 08:10:10
那你线性化后是怎么处理的，胶回收还是酚氯仿抽提的？
这个是很重要的，DNA中如果有乙醇什么的话，电转就不大容易成功。
感受态的话现做现用，就算做是再不好，也不可能一个都不长的。
当然了，感受态一定要在低 ...

谢谢班组，我使用片段回收试剂盒回收线性化的DNA，通风20min以上！
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9楼2012-08-07 11:35:24
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小丹木木

荣誉版主 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
9楼: Originally posted by weizhe34 at 2012-08-07 11:35:24
谢谢班组，我使用片段回收试剂盒回收线性化的DNA，通风20min以上！...

这样子的话，我也不知道原因了
从头再做一次呗，
所有的都重新做吧
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10楼2012-08-07 15:30:58
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