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weizhe34

至尊木虫 (职业作家)

[求助] 电转酵母,请求帮助!

请问各位大家,我电转酵母没长出来,具体是,载体PPICZBa,线性化后片段纯化的DNA20ug,于自己做的X33,GS115感受态,点击杯0.2cm,电压,1.8kv,电容25uF,电阻200,电击5msec左右,长了两天没有,长三天以上感觉是杂菌,请高手分析,为什么长不出来,其他操作我是按照invitrogen说明来的,O(∩_∩)O谢谢了!
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healy13

禁虫 (小有名气)

感谢参与,应助指数 +1
本帖内容被屏蔽

2楼2012-08-06 10:32:47
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weizhe34

至尊木虫 (职业作家)

引用回帖:
2楼: Originally posted by healy13 at 2012-08-06 10:32:47
会不会是你感受态没有做好?或者你的DNA线性化不完全~

你在么? 感受态按照说明书做的。 线性化4h 是NEB的酶,酶切后我电泳很正常的
3楼2012-08-06 14:06:30
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小丹木木

荣誉版主 (著名写手)

其实我也有一次电转没长出来
说说我的经验,你是不是电转的时候电转杯没有卡到位,电转完成后,你可以检查一下,电转杯上是否有划痕,这个很重要的。后来我就重点注意这个,然后就电转很成功,长的很HAPPY.
当然线性化 DNA的质量了,感受态的质量都很重要的
我是觉得,如果你电转后一个转化子都没有,那么就要考虑你是不是根本么有电转。纯属个人看法,希望实验顺利
4楼2012-08-06 15:21:11
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weizhe34

至尊木虫 (职业作家)

引用回帖:
3楼: Originally posted by weizhe34 at 2012-08-06 14:06:30
你在么? 感受态按照说明书做的。 线性化4h 是NEB的酶,酶切后我电泳很正常的...

你好,电转被有划痕,感受态不知道好不好,有什么好的建议么,谢谢了!
5楼2012-08-06 17:15:16
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weizhe34

至尊木虫 (职业作家)

引用回帖:
3楼: Originally posted by weizhe34 at 2012-08-06 14:06:30
你在么? 感受态按照说明书做的。 线性化4h 是NEB的酶,酶切后我电泳很正常的...

你好,电转被有划痕,感受态不知道好不好,有什么好的建议么,谢谢了!
6楼2012-08-06 17:20:51
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weizhe34

至尊木虫 (职业作家)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 小丹木木 at 2012-08-06 15:21:11
其实我也有一次电转没长出来
说说我的经验,你是不是电转的时候电转杯没有卡到位,电转完成后,你可以检查一下,电转杯上是否有划痕,这个很重要的。后来我就重点注意这个,然后就电转很成功,长的很HAPPY.
当然线 ...

你好,电转被有划痕,感受态不知道好不好,有什么好的建议么,谢谢了!
7楼2012-08-06 17:20:57
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小丹木木

荣誉版主 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
引用回帖:
7楼: Originally posted by weizhe34 at 2012-08-06 17:20:57
你好,电转被有划痕,感受态不知道好不好,有什么好的建议么,谢谢了!...

那你线性化后是怎么处理的,胶回收还是酚氯仿抽提的?
这个是很重要的,DNA中如果有乙醇什么的话,电转就不大容易成功。
感受态的话现做现用,就算做是再不好,也不可能一个都不长的。
当然了,感受态一定要在低温下做啊,这个是很重要的

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

8楼2012-08-07 08:10:10
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weizhe34

至尊木虫 (职业作家)

送鲜花一朵
引用回帖:
8楼: Originally posted by 小丹木木 at 2012-08-07 08:10:10
那你线性化后是怎么处理的,胶回收还是酚氯仿抽提的?
这个是很重要的,DNA中如果有乙醇什么的话,电转就不大容易成功。
感受态的话现做现用,就算做是再不好,也不可能一个都不长的。
当然了,感受态一定要在低 ...

谢谢班组,我使用片段回收试剂盒回收线性化的DNA,通风20min以上!
9楼2012-08-07 11:35:24
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小丹木木

荣誉版主 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
9楼: Originally posted by weizhe34 at 2012-08-07 11:35:24
谢谢班组,我使用片段回收试剂盒回收线性化的DNA,通风20min以上!...

这样子的话,我也不知道原因了
从头再做一次呗,
所有的都重新做吧
10楼2012-08-07 15:30:58
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