应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 电转酵母，请求帮助！
51/1返回列表
查看: 1078  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

weizhe34

至尊木虫 (职业作家)

[求助] 电转酵母，请求帮助！

请问各位大家，我电转酵母没长出来，具体是，载体PPICZBa，线性化后片段纯化的DNA20ug，于自己做的X33，GS115感受态，点击杯0.2cm，电压，1.8kv，电容25uF，电阻200,电击5msec左右，长了两天没有，长三天以上感觉是杂菌，请高手分析，为什么长不出来，其他操作我是按照invitrogen说明来的，O(∩_∩)O谢谢了！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-08-06 07:19:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

weizhe34

至尊木虫 (职业作家)
送鲜花一朵
引用回帖:
8楼: Originally posted by 小丹木木 at 2012-08-07 08:10:10
那你线性化后是怎么处理的，胶回收还是酚氯仿抽提的？
这个是很重要的，DNA中如果有乙醇什么的话，电转就不大容易成功。
感受态的话现做现用，就算做是再不好，也不可能一个都不长的。
当然了，感受态一定要在低 ...

谢谢班组，我使用片段回收试剂盒回收线性化的DNA，通风20min以上！
赞一下 回复此楼
9楼2012-08-07 11:35:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

healy13

禁虫 (小有名气)
感谢参与，应助指数 +1
本帖内容被屏蔽
2楼2012-08-06 10:32:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

weizhe34

至尊木虫 (职业作家)
引用回帖:
2楼: Originally posted by healy13 at 2012-08-06 10:32:47
会不会是你感受态没有做好？或者你的DNA线性化不完全~

你在么？ 感受态按照说明书做的。 线性化4h 是NEB的酶，酶切后我电泳很正常的
赞一下 回复此楼
3楼2012-08-06 14:06:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小丹木木

荣誉版主 (著名写手)
其实我也有一次电转没长出来
说说我的经验，你是不是电转的时候电转杯没有卡到位，电转完成后，你可以检查一下，电转杯上是否有划痕，这个很重要的。后来我就重点注意这个，然后就电转很成功，长的很HAPPY.
当然线性化 DNA的质量了，感受态的质量都很重要的
我是觉得，如果你电转后一个转化子都没有，那么就要考虑你是不是根本么有电转。纯属个人看法，希望实验顺利
赞一下 回复此楼
4楼2012-08-06 15:21:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 G6APbkg8SA6w 2026-08-29 5/250 2026-08-30 18:40 by hZiFeudZyoGR
[考博] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 6/300 2026-08-30 18:20 by hZiFeudZyoGR
[公派出国] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +7 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 9/450 2026-08-30 17:34 by hZiFeudZyoGR
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +8 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 12/600 2026-08-30 17:11 by hZiFeudZyoGR
[考博] 找导师 +6 yuanjiabao 2026-08-29 7/350 2026-08-30 14:40 by 生科新手
[基金申请] 有没有仍没收到信息的 +6 德尚中行 2026-08-27 7/350 2026-08-30 12:53 by Bxndjjd
[博后之家] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 8/400 2026-08-30 12:03 by l0VvVHGBGRLv
[基金申请] 29号明天会评吗 +3 笨笨唐 2026-08-28 3/150 2026-08-30 09:29 by cww8181
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 4/200 2026-08-30 06:57 by ZPa0EcMwuECS
[基金申请] 为什么到现在没收到通知？ +4 tannykie 2026-08-29 4/200 2026-08-29 17:14 by lmz0216
[教师之家] 导师吐槽：我怎么摊上了这么个极品研究生！ +9 苏东坡二世 2026-08-23 9/450 2026-08-29 14:41 by hustersqt
[基金申请] 为什么资助数各大高校都创新高，自己申请怎么就这么难 +12 Kittylucky 2026-08-27 13/650 2026-08-29 00:04 by superceng
[基金申请] 系统查不到 +11 董八千 2026-08-26 11/550 2026-08-28 18:06 by Leogzhya
[基金申请] 面上合作单位盖章 +5 ssyjh 2026-08-27 5/250 2026-08-27 20:50 by gdfollow
[基金申请] 申请删除本帖 +6 lyz123lyz 2026-08-27 7/350 2026-08-27 17:31 by 宁静致远sy
[基金申请] 为什么 国际(地区)合作与交流项目 没有放榜？ 10+3 majunge000 2026-08-26 11/550 2026-08-27 08:42 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 国际合作可查了，中了面上 (EPI+1)(金币+50) +18 Ldrop2023 2026-08-26 18/900 2026-08-26 11:15 by cmrandy
[基金申请] 牛来！米来！面来！ +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
[基金申请] 某些机构，以效率低为荣，以效率低作为存在感 +9 yuleib84 2026-08-25 10/500 2026-08-25 17:14 by alexon
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +9 图啦图啦 2026-08-24 10/500 2026-08-25 11:59 by 南海小哥
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭