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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助：图位克隆最后测序阶段的问题
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love04love07

铁虫 (小有名气)

[求助] 求助：图位克隆最后测序阶段的问题

前段做水稻一个基因的精细定位，已经将该基因定位到140KB。目前正在进行测序工作，其中遇到了好多困难，请各位帮帮忙吧，小弟在此谢过了。

1、群体有两千多，而且离着丝点不算近，但是却只能定到140KB，是不是和杂交的品种有关系？

2、如何测序更效率高？我们现在是做两管PCR，大小在800bp左右，一管测正向，一管测反向。听别人说可以几管混起来测，不知道哪个更准确呢？

3、我们目前测序是按NCBI的预测序列，但是又发现gramene里面的预测和NCBI有很大出入，不知道该以哪个为准？
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1楼 2012-06-14 19:04:55
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1949stone

荣誉版主 (知名作家)

海纳百川
金币返还 帮顶一次
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海纳百川止于至善
3楼2013-07-02 09:58:44
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huzhen1990

铜虫 (初入文坛)
楼主请问怎样在gramene和NCBI上预测序列的啊？我定位的进度和你一样，定在120kb就定不进去了，后续步骤不知道怎么做了。
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2楼2012-07-03 12:25:53
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phdcheng

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
4楼2013-07-03 15:48:43
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dingxianlo

金虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by phdcheng at 2013-07-03 15:48:43
我做大豆定位，最近刚定出两个突变体，找到突变基因，我也是将定位区间锁定在200kb左右，就没有杂合子了，之后，我把工作的重心不是放在定位上了，就是在这200kb的区间范围内，找出所有的基因以及已经注释基因的功能 ...

请问我打算做大豆质核雄性不育系和恢复系恢复基因的精细定位，并想通过图位克隆技术将恢复基因克隆出来并进行功能验证，不知道是否可行
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未来掌握在自己手中，希望通过这个网站认识更多的朋友，能在学习、工作、生活上相互帮忙。爱拼才会赢！
5楼2013-07-16 10:31:51
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