24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 2751  |  回复: 10

qiannianchao

金虫 (初入文坛)

[求助] SOE pcr目的条带很暗,非特异条带很亮?

引物12:1000bp左右;
引物34:500bp左右;
重叠部分长度:40bp左右;
反应条件:50-52℃退火45s,延伸7min,一开始10-15个循环,然后加了1和4引物,30-40个循环;
得到的电泳结果总是:出现非特异性条带,大小600bp左右,而且很亮!但是目的条带处却很暗,无法回收。
请教高手这种情况是什么原因造成的,需要怎么样改善,在线等待。。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小猫三两只

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西瓜: 金币+1, 鼓励交流 2012-06-06 19:01:10
你是先进行10-15个循环以后再加上1和4引物的吗?这种没有做过,我们平时做的都是先分别将这两段产物P出来,纯化后按1:1比例混合作模板,再用全长的引物扩增,没有出现过你说的那种情况。
2楼2012-06-06 16:49:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qiannianchao

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 小猫三两只 at 2012-06-06 16:49:48
你是先进行10-15个循环以后再加上1和4引物的吗?这种没有做过,我们平时做的都是先分别将这两段产物P出来,纯化后按1:1比例混合作模板,再用全长的引物扩增,没有出现过你说的那种情况。

我们也是先将两端产物回收后,先进行10-15个循环的pcr,再加全长引物扩增的,引物设计检查了几遍,没有什么问题,难道是退火温度或者是延伸时间不够?
3楼2012-06-06 17:03:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

beer胖

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-06-14 14:01:51
qiannianchao: 金币+2, ★★★很有帮助, 你的方法可以,金币给你 2012-07-25 16:48:17
延伸时间怎么会这么长?7min?
可以多试几个退火温度试试看
另外,你回收两个片段的时候最后一步是用试剂盒里的elution buffer溶解的还是用无菌水?一定要用水洗。
祝好运
4楼2012-06-07 14:25:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qiannianchao

金虫 (初入文坛)

已经出来结果了,谢谢
5楼2012-06-14 12:44:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

quietorange

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by qiannianchao at 2012-06-14 12:44:25
已经出来结果了,谢谢

能说说最后怎么做出来的吗?我现在遇到同样的问题,虽然有目的条带,但是非特异性带和smear都挺严重的。
6楼2012-06-27 16:47:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jiuzi59

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

smear都挺严重的的话一般和引物设计有关,我做的PCR产物不纯化,效果也非常好的。你的重叠后的片段才1.5kb,应该很好P啊。
7楼2012-06-29 06:55:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qiannianchao

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by quietorange at 2012-06-27 16:47:30
能说说最后怎么做出来的吗?我现在遇到同样的问题,虽然有目的条带,但是非特异性带和smear都挺严重的。...

我最后加的无菌水
8楼2012-07-25 16:45:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qsx04152006

木虫 (知名作家)

楼主给个联系方式啊,好向你请教soepcr怎么设计引物啊,具体怎么连接啊?
9楼2013-09-02 12:56:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qsx04152006

木虫 (知名作家)

请问:soepcr怎么设计引物啊,基因1和基因2各设计两个引物a、b和c、d,其中b引物右端是含有基因2 的引物还是含有基因2的5“端序列,同理,引物C 5”端是含有基因1的下游引物还是含有基因1的序列?谢谢。
10楼2013-09-02 13:04:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 qiannianchao 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 270求调剂 +10 杨乐369 2026-04-11 10/500 2026-04-11 16:18 by 明月此时有
[考研] 0860004 求调剂 309分 +8 Yin DY 2026-04-08 8/400 2026-04-11 12:32 by zhq0425
[考研] 求调剂 +6 archer.. 2026-04-09 8/400 2026-04-11 10:55 by zhq0425
[考研] 求调剂 +5 电气300求调剂不 2026-04-08 5/250 2026-04-11 10:17 by Delta2012
[考研] 284求调剂 +12 archer.. 2026-04-10 13/650 2026-04-11 08:44 by zhq0425
[考研] 本科211 工科085400 280分求调剂 可跨专业 +11 LZH(等待调剂中 2026-04-10 11/550 2026-04-11 08:39 by zhq0425
[考研] 0703调剂 +19 拾玖壹 2026-04-04 22/1100 2026-04-10 22:16 by bljnqdcc
[考研] 求调剂 +5 不会飞的鱼@ 2026-04-10 5/250 2026-04-10 19:07 by chemisry
[考研] 一志愿京区985,085401,与本科专业一致,电子信息工程, +4 阳光开朗的男孩 2026-04-10 4/200 2026-04-10 18:27 by shenrf
[考研] 337求调剂 +4 Gky09300550, 2026-04-09 4/200 2026-04-09 17:18 by 帕尔马拉特
[考研] 化学工程与技术专业一志愿哈工程 291分B区 国家级大创负责人 有一作论文 +13 Emmy~ 2026-04-09 13/650 2026-04-09 14:47 by only周
[考研] 0860004 求调剂 309分 +6 Yin DY 2026-04-09 6/300 2026-04-09 10:19 by 啊李999
[考研] 270求调剂 +3 031127 2026-04-06 4/200 2026-04-08 21:00 by 逆水乘风
[考研] 一志愿郑州大学085600求调剂 +21 吃的不少 2026-04-05 24/1200 2026-04-08 16:47 by sunhuadong
[考研] 机械工程264学硕求调剂 +3 qiushangxian 2026-04-06 3/150 2026-04-08 01:53 by Linzejun
[考博] 博士申请 +3 IQwQl 2026-04-05 3/150 2026-04-07 20:31 by greychen00
[考研] 材料求调剂 +18 一样YWY 2026-04-05 18/900 2026-04-07 15:49 by dxlg
[考研] 292求调剂 +4 lilllllxccc 2026-04-05 5/250 2026-04-07 09:29 by 纺大杨老师
[考研] 307求调剂 +3 所念及所望 2026-04-06 3/150 2026-04-06 17:30 by 土木硕士招生
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +5 崔wj 2026-04-05 5/250 2026-04-06 15:40 by lin-da
信息提示
请填处理意见