24小时热门版块排行榜    

查看: 2685  |  回复: 10
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

qiannianchao

金虫 (初入文坛)

[求助] SOE pcr目的条带很暗,非特异条带很亮?

引物12:1000bp左右;
引物34:500bp左右;
重叠部分长度:40bp左右;
反应条件:50-52℃退火45s,延伸7min,一开始10-15个循环,然后加了1和4引物,30-40个循环;
得到的电泳结果总是:出现非特异性条带,大小600bp左右,而且很亮!但是目的条带处却很暗,无法回收。
请教高手这种情况是什么原因造成的,需要怎么样改善,在线等待。。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qsx04152006

木虫 (知名作家)

请问:soepcr怎么设计引物啊,基因1和基因2各设计两个引物a、b和c、d,其中b引物右端是含有基因2 的引物还是含有基因2的5“端序列,同理,引物C 5”端是含有基因1的下游引物还是含有基因1的序列?谢谢。
10楼2013-09-02 13:04:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

小猫三两只

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西瓜: 金币+1, 鼓励交流 2012-06-06 19:01:10
你是先进行10-15个循环以后再加上1和4引物的吗?这种没有做过,我们平时做的都是先分别将这两段产物P出来,纯化后按1:1比例混合作模板,再用全长的引物扩增,没有出现过你说的那种情况。
2楼2012-06-06 16:49:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qiannianchao

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 小猫三两只 at 2012-06-06 16:49:48
你是先进行10-15个循环以后再加上1和4引物的吗?这种没有做过,我们平时做的都是先分别将这两段产物P出来,纯化后按1:1比例混合作模板,再用全长的引物扩增,没有出现过你说的那种情况。

我们也是先将两端产物回收后,先进行10-15个循环的pcr,再加全长引物扩增的,引物设计检查了几遍,没有什么问题,难道是退火温度或者是延伸时间不够?
3楼2012-06-06 17:03:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

beer胖

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-06-14 14:01:51
qiannianchao: 金币+2, ★★★很有帮助, 你的方法可以,金币给你 2012-07-25 16:48:17
延伸时间怎么会这么长?7min?
可以多试几个退火温度试试看
另外,你回收两个片段的时候最后一步是用试剂盒里的elution buffer溶解的还是用无菌水?一定要用水洗。
祝好运
4楼2012-06-07 14:25:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0857调剂 +4 一ll半 2026-02-28 5/250 2026-03-02 02:33 by 908055542
[考研] 求调剂 +5 yunziaaaaa 2026-03-01 6/300 2026-03-01 23:57 by ccp273206157
[考研] 材料学硕318求调剂 +11 February_Feb 2026-03-01 13/650 2026-03-01 23:53 by ccp273206157
[考研] 0854复试调剂 276 +3 wmm9 2026-03-01 3/150 2026-03-01 23:13 by 热情沙漠
[考研] 299求调剂 +3 Y墨明棋妙Y 2026-02-28 5/250 2026-03-01 21:01 by tangxiaotian
[考研] 化工299分求调剂 一志愿985落榜 +5 嘻嘻(*^ω^*) 2026-03-01 5/250 2026-03-01 19:47 by 无际的草原
[考研] 298求调剂 +6 axyz3 2026-02-28 6/300 2026-03-01 19:00 by 18137688336
[考研] 0856材料求调剂 +11 hyf hyf hyf 2026-02-28 12/600 2026-03-01 18:57 by 18137688336
[考研] 295求调剂 +7 19171856320 2026-02-28 7/350 2026-03-01 18:54 by 18137688336
[考研] 材料学调剂 +9 提神豆沙包 2026-02-28 11/550 2026-03-01 18:15 by ms629
[考研] 281求调剂 +4 2026计算机_诚心 2026-03-01 7/350 2026-03-01 17:20 by 2026计算机_诚心
[考研] 321求调剂一志愿东北林业大学材料与化工英二数二 +4 虫虫虫虫虫7 2026-03-01 7/350 2026-03-01 16:52 by caszguilin
[考研] 化工专硕342,一志愿大连理工大学,求调剂 +3 kyf化工 2026-02-28 4/200 2026-03-01 16:49 by yywzz
[基金申请] 刚录用,没有期刊号,但是在线可看的论文可以放为代表作吗 10+3 arang1 2026-03-01 3/150 2026-03-01 16:43 by babero
[考研] 311求调剂 +6 亭亭亭01 2026-03-01 6/300 2026-03-01 15:41 by 324616
[考研] 求调剂 +6 repeatt?t 2026-02-28 6/300 2026-03-01 14:37 by Sakura绘
[考研] 295复试调剂 +3 简木ChuFront 2026-03-01 3/150 2026-03-01 14:27 by zzxw520th
[考研] 302材料工程求调剂 +4 Doleres 2026-03-01 5/250 2026-03-01 11:52 by liqiongjy
[考研] 304求调剂 +3 52hz~~ 2026-02-28 5/250 2026-03-01 00:00 by 52hz~~
[硕博家园] 【博士招生】太原理工大学2026化工博士 +4 N1ce_try 2026-02-24 8/400 2026-02-26 08:40 by N1ce_try
信息提示
请填处理意见