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thendlee金虫 (正式写手)
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[求助]
关于融合PCR的问题
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鄙人在做一个融合PCR，第一个片段约2KB，第二个片段约11KB，重合片段大约在80bp左右，我按照资料里介绍的方法，先分别P出两个独立的片段，然后再不加引物融合8--10个循环，最后拿中间产物加最上游和最下游的引物30循环，可是一直出不来结果，最后跑胶的时候（如图）还是出现两条独立的条带，加样孔倒是特别亮，会不会融合出一条特别长的片段呢？我将融合后的产物纯化回收过，跑胶时上样孔依然很亮，不知道是什么原因，求助各位大神。 注：孔1为15000的marker 孔2、3为融合PCR产物，孔4是另一个PCR产物的对照，以示别的加样孔并不亮 不加引物的体系为： 片段1 3微升 片段2 6微升 dNTP 4 PS buffer 10 水 26.5 primestar 0.5 98度10S 51.6度15S 72度10M 8个循环 加引物的体系 中间产物 5微升 dntp 5 PS 10 水 26.5 上游 1.5 下游 1.5 primestar 0.5 98度10秒 52度15秒 72度11分半  |
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chjinzhi
银虫 (正式写手)
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13楼2012-07-20 17:22:59