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新人关于引物设计的问题
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本人做定点突变，设计一对包含突变位点的引物 其中反义链引物（即退火时与正义链结合的引物，不知道是不是这样称呼，新手啊  ）为：5’-CCAGGTCGGACCCCCGAGGGACTCTG-3‘试图通过overlap pcr将突变引物原基因中，然而在第一轮pcr中，电泳条带位置与预期的不符，因此怀疑引物错配，通过使用NCBI的blast，将引物与模板进行比对，结果如图所示   可以发现，除了第一对是模板与引物的同源序列（即所求突变位点所在的相应位点）外，其他有好几对是引物中友6,7个碱基与模板其他位置的错配。而且这些错配的碱基在突变位点的两端都存在，甚至包括突变位点！ 在pcr过程中，采用 Touch Down PCR，可是还是出现错误的条带 各位高人，这可如何处理啊 [ Last edited by 麻花13 on 2012-2-21 at 18:30 ] |
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