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点突变pcr后跑琼脂糖凝胶电泳发现条带不对，请高手指点！！！
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本人想把一个质粒（7.8kbp）中的一个氨基酸变成另一个氨基酸，因此有连续三个点要突变。 选择使用的方法是合成两个反向互补的包含突变位点的引物，GC%=60% Tm=86.8如下： F： CACAGTCTGGGGCATCGATCAGCTCCAGGCAAGAG R：CTCTTGCCTGGAGCTGATCGATGCCCCAGACTGTG 用Fermentas的Premix PrimeSTAR 进行PCR 98℃ 1min 1cycle；98℃ 10sec， 55℃ 5sec，72℃ 8min 24cycle；72℃ 10min 1cycle PCR后进行电泳 第一泳道为maker 第二泳道为不加引物做的PCR 最后一个泳道为模板质粒 中间的都是不同浓度的模板和引物做的PCR产物 可见PCR产物最亮的条带与模板质粒位置相差很大  将PCR产物用DpnI酶切后 模板切掉；再进行转化，发现LB平板上有两种克隆，一种是很大很亮的单克隆，但在它们旁边还有许多星星点点的小克隆 求助！求高手！请问这是怎么回事？ 出现什么问题了吗？ 之前实验室有人用相同方法做不同的质粒是可以成功的 |
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