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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白表达问题
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backsunboy

木虫 (正式写手)

[交流] 蛋白表达问题 已有4人参与

各位同仁：
    小弟最近做原核表达，目的蛋白预测为50KDa，用的是pGEX-4T-2原核表达载体，上面有GST（26KDa）标签，表达条件为28度，IPTG终浓度为1mM，诱导时间16小时，经检测蛋白以包涵体形式存在，但是我想要可溶性的蛋白，希望各位能给点建设性建议，小弟不胜感激。
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1楼 2011-10-19 10:34:01
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yidC423R

银虫 (初入文坛)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
silicare(金币+2): all means=？ 2011-11-02 08:19:31
Not sure whether you can do that. If you can, slow down the expression by all means may help.

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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3楼2011-10-20 07:57:44
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doublehelix

木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
silicare(金币+3, BioEPI+1): 把原理说出来就好了 2011-11-02 08:18:49
1:诱导温度可适当 再降一下，如25度
2：IPTG浓度降下来，如0.2
3：IPTG时OD0.8-1.0加
4：摇床转速降下来，如减半
试试吧，应该会有效果
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2011-10-19 11:29:22
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zc10052157

新虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
楼上说的很全面   以前做过16°的   

不过有些蛋白表达是基因本身的问题没有办法在原核系统里可溶表达

希望你改变条件能做出来
赞一下(1人) 回复此楼
hold住
4楼2011-10-20 09:16:11
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backsunboy

木虫 (正式写手)
谢谢大家的建议，我试试
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5楼2011-10-20 09:40:04
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